Contador de células
En el contador de células: Células HEK293-GFP
Las células embrionarias de riñón humano 293, también conocidas como células HEK293, 293 o incluso como células HEK, son una línea celular derivada de riñón embrionario humano. A principios de los años 70 del siglo pasado, Alex van der Eb aisló estas células en su laboratorio de la Universidad de Leiden (Holanda) y otro miembro de su laboratorio las transformó con adenovirus, obteniendo la línea celular que se utiliza actualmente. Las células HEK293 son fáciles de crecer y transfectar, por lo que se han usado ampliamente en experimentos de transfección, expresión de proteínas y producción de vacunas. Hemos adquirido imágenes de células HEK293 transformadas mediante lentivirus con proteína fluorescente verde (GFP; GenTarget Inc.) para mostrar el análisis de la confluencia de las células en el citómetro con adquisición de imágenes SpectraMax MiniMax300.
Ver el seminario web de detección de células StainFree
Descargar la nota de aplicación de detección de células StainFree
Descargar eBook: Realice recuentos de células de forma profesional
Figura 1: Identificación StainFree de células HEK293-GFP
Se adquirieron imágenes de las células HEK293-GFP con el citómetro con adquisición de imágenes SpectraMax i3 MiniMax 300 y las células se identificaron utilizando una configuración de análisis de campo personalizada. A la izquierda se muestra la imagen original con luz transmitida y a la derecha, la misma imagen con máscaras púrpura que indican las áreas de confluencia identificadas por el software.
Figura 2: Definición de las áreas celulares y de fondo
Uso de herramientas de dibujo en el software SoftMax Pro para definir las áreas celulares (amarillo) y de fondo (azul) de las imágenes.
Figura 3: Imágenes de células HEK293-GFP tomadas en el citómetro MiniMax
Las células HEK293-GFP se sembraron a 20000, 5000 y 1250 células por pocillo y se adquirieron imágenes en el canal de fluorescencia verde del citómetro MiniMax.
Figura 4: Análisis StainFree frente a fluorescencia
Comparación de las áreas de confluencia medidas con el análisis StainFree (círculos azules) y el análisis con fluorescencia (círculos verdes). El porcentaje de confluencia con StainFree concuerda casi perfectamente con la confluencia analizada con fluorescencia.
Consejo 1:
A veces las células están demasiado agregadas para poder contarlas individualmente. En estos casos se puede utilizar la configuración “Field Analysis” (Análisis de campo) del software SoftMax Pro para buscar áreas cubiertas por células o porcentaje de confluencia. El análisis StainFree se puede emplear para obtener imágenes de células en el canal de LT. Para algunos tipos de células, la configuración “Cells” (Células) predefinida del software identificará áreas cubiertas de células de forma exacta y automática. Para HEK293, esta configuración predefinida funciona razonablemente bien y se puede utilizar para estimar la confluencia para fines de control de calidad.
Consejo2:
Si es necesaria una estimación ligeramente más precisa de la confluencia, una configuración personalizada, definida por el usuario, puede ser el camino a seguir. Una clave para conseguir mediciones exactas de la confluencia celular es dibujar con la herramienta de fondo sobre algunas áreas que estén muy próximas a los bordes de las áreas de confluencia, pero fuera de ellos. Esto ayuda a minimizar la cantidad de áreas que limitan las células y que se cuentan como áreas cubiertas por células.
Kit de herramientas de análisis de células HEK293-GFP
- Plataforma de detección de microplacas multimodo SpectraMax® i3
- Citómetro con adquisición de imágenes SpectraMax® MiniMax™ 300
- Software SoftMax® Pro
Configuración del instrumento
Tipo de análisis: Field Analysis (Análisis de campo)
Longitud de onda para buscar áreas de confluencia: LT o 541
Acerca de la tecnología de detección de células StainFree
Los ensayos basados en la adquisición de imágenes celulares normalmente requieren el uso de sondas fluorescentes que pueden ser tóxicas o funcionar únicamente en células fijadas. Un método sin marcaje para analizar recuentos celulares y la confluencia celular permite a los investigadores monitorizar cuantitativamente la proliferación celular y la salud de las células sin necesidad de flujos de trabajo laborioso que pueden alterar la viabilidad celular.
La plataforma de microplacas multimodo SpectraMax i3 con el citómetro con adquisición de imágenes MiniMax 300 utiliza la exclusiva tecnología de detección de células StainFree pendiente de patente que le permite realizar ensayos de proliferación celular, citotoxicidad y otros ensayos sin tinciones nucleares como DAPI, que se intercala en el ADN, o colorantes de células vivas que son realmente tóxicos para las células a largo plazo.