Contador de células

En el contador de células: Células NIH3T3

Establecida en 1963 por los científicos George Todardo y Howard Green, la línea celular NIH3T3 se obtuvo a partir de fibroblatos embrionarios de ratón. Las células se inmortalizaron espontáneamente y recibieron el nombre de su protocolo de cultivo, “3-day transfer, inoculum 3x105 cells” (transferencia a 3 días, inóculo de 3 x 105 células). Ahora es la línea celular de fibroblastos estándar y las células se conocen como excelentes huéspedes de transfección y como modelos para experimentos de pluripotencia inducida de células madre. También son útiles como células alimentadoras en investigación con células madre embrionarias humanas y a menudo se utilizan para el cultivo de queratinocitos, ya que los factores de crecimiento de NIH3T3 favorecen el crecimiento de los queratinocitos.

La estructura elongada y el tamaño celular variable de las células NIH3T3 pueden plantear dificultades a la hora de analizar las imágenes. Sin embargo, con la tecnología StainFree, podemos contar estar células de forma irregular con gran exactitud.

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Figura 1. Análisis StainFree de células NIH3T3

Se adquirieron imágenes de las células NIH3T3 con el citómetro con adquisición de imágenes SpectraMax MiniMax 300 y las células se identificaron utilizando la configuración de análisis “CellsB” (Células B) predefinida. A la izquierda se muestra la imagen original con luz transmitida y a la derecha, la misma imagen con máscaras púrpura que indican las células identificadas por el software.

Figura 2: Recuentos celulares de células NIH3T3

Las células NIH3T3 se sembraron a una dilución 1:2 en serie en una placa de 96 pocillos. Las células se fijaron y se tiñeron con un colorante nuclear. Tras la tinción, se utilizó el citómetro con adquisición de imágenes SpectraMax MiniMax 300 para contar las células usando la tinción nuclear roja (curva roja) o la tecnología de detección celular StainFree™ (curva azul) como base para la identificación de las células. Ambos métodos de recuento proporcionan resultados prácticamente idénticos y ambas curvan tienen un valor de r2 > 0,99.

Figura 3. Células NIH3T3 teñidas

Células NIH3T3 teñidas con faloidina-AlexaFluor 488 y colorante nuclear rojo. Se adquirieron imágenes de las células en el citómetro con adquisición de imágenes SpectraMax MiniMax 300.

Consejo:

Para muchos cultivos de NIH3T3, puede hacer recuentos de células fácilmente con una de las configuraciones predefinidas del software SoftMax Pro. Se puede utilizar la configuración “CellsB” (Células B) o “CellsD” (Células D). Alternativamente, puede utilizar las herramientas de dibujo para crear una configuración nueva personalizada adecuada para sus células en particular. Para evitar los problemas que plantean la forma irregular de las células y su tendencia a agregarse, puede dibujar ligeramente dentro de los límites de una célula de interés. Para evitar posibles recuentos excesivos causados por los largos procesos de estas células, dibuje simplemente sobre los procesos con la herramienta de fondo para evitar que se cuenten como células independientes.

Kit de herramientas de análisis de células NIH3T3

Configuración del instrumento

Parámetro
Configuración para recuento celular
Configuración óptica
Citómetro con adquisición de imágenes MiniMax de SpectraMax300
Modo de lectura
Adquisición de imágenes
Tipo de lectura
Punto final
Configuración de longitud de onda
Luz transmitida
Configuración de adquisición de imágenes
Exposición: 3 ms
Configuración de análisis de imágenes
Tipo de análisis: “Discrete Object Analysis” (Análisis de objetos definidos)
Encontrar objetos
Configuración: Se puede usar la configuración predefinida “CellsB” (Células B) o “CellsD” (Células D), o la configuración personalizada

Acerca de la tecnología de detección de células StainFree

Los ensayos basados en la adquisición de imágenes celulares normalmente requieren el uso de sondas fluorescentes que pueden ser tóxicas o funcionar únicamente en células fijadas. Un método sin marcaje para analizar recuentos celulares y la confluencia celular permite a los investigadores monitorizar cuantitativamente la proliferación celular y la salud de las células sin necesidad de flujos de trabajo laborioso que pueden alterar la viabilidad celular.

La plataforma de microplacas multimodo SpectraMax i3 con el citómetro con adquisición de imágenes MiniMax 300 utiliza la exclusiva tecnología de detección de células StainFree pendiente de patente que le permite realizar ensayos de proliferación celular, citotoxicidad y otros ensayos sin tinciones nucleares como DAPI, que se intercala en el ADN, o colorantes de células vivas que son realmente tóxicos para las células a largo plazo.