Contador de células
En el contador de células: Células endoteliales de aorta de rata
Las células endoteliales de aorta de rata se han utilizado en diversos estudios científicos, como adhesión célula-célula, migración y angiogénesis, y en la investigación de vías de señalización celular implicadas en la función endotelial en condiciones normales y patológicas. Al ser células primarias, su uso en el cribado de fármacos puede ser complicado. La adquisición de imágenes de células vivas y la medición de la confluencia celular antes de realizar un ensayo pueden ser críticas para obtener unos buenos resultados.
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Figura 1. Imagen con luz transmitida de células endoteliales de aorta de rata
La imagen muestra la diversidad de morfologías y los procesos celulares en un único cultivo primario.
Figura 2. Recuento StainFree de células endoteliales de aorta de rata
Se adquirieron imágenes de células endoteliales de aorta de rata con el citómetro con adquisición de imágenes SpectraMax i3 MiniMax 300 y las células se identificaron utilizando una configuración de análisis personalizada. A la izquierda se muestran las imágenes originales con luz transmitida (superior, cultivo de mayor densidad; inferior, cultivo de menor densidad) y a la derecha, las mismas imágenes con máscaras púrpura que indican las células identificadas por el software.
Las imágenes fueron cedidas generosamente por la Dra. Virginia Huxley de la Universidad de Missouri, Columbia (MO, EE. UU.), con la ayuda de nuestro científico de aplicaciones de campo, Randy Milano.
Consejo:
La citometría con adquisición de imágenes de las células endoteliales de aorta de rata puede plantear problemas debido a que son muy planas, muestran multitud de morfologías diferentes y a veces incluso tienen largos procesos reminiscentes del crecimiento axonal neuronal, como se muestra en la figura 1. Aquí es donde el algoritmo de aprendizaje automático supervisado que se usa en la tecnología StainFree es realmente útil. En la configuración de análisis de la imagen seleccione la opción “Create New Setting” (Crear nueva configuración) y al dibujar ponga su atención en el centro de las células, ignorando los procesos celulares (crecimientos axonales). Asegúrese de incluir algunas células representativas de diferentes morfologías y obtendrá unos resultados como los de la figura 2.
Consejo útil: Configurar el ajuste del foco en un valor más negativo puede proporcionar imágenes más definidas de las células que al software le resulta más fácil contar.
Kit de herramientas de análisis de células endoteliales de aorta de rata
- Plataforma de detección de microplacas multimodo SpectraMax® i3
- Citómetro con adquisición de imágenes SpectraMax® MiniMax™ 300
- Software SoftMax® Pro
Configuración del instrumento
Exposición: 7 ms
Ajuste del foco de: -455 µm (puede optimizarse en función de las características de las células empleadas)
Tipo de análisis: “Discrete Object Analysis” (Análisis de objetos definidos)
Longitud de onda para la búsqueda de objetos: LT
Acerca de la tecnología de detección de células StainFree
Los ensayos basados en la adquisición de imágenes celulares normalmente requieren el uso de sondas fluorescentes que pueden ser tóxicas o funcionar únicamente en células fijadas. Un método sin marcaje para analizar recuentos celulares y la confluencia celular permite a los investigadores monitorizar cuantitativamente la proliferación celular y la salud de las células sin necesidad de flujos de trabajo laborioso que pueden alterar la viabilidad celular.
La plataforma de microplacas multimodo SpectraMax i3 con el citómetro con adquisición de imágenes MiniMax 300 utiliza la exclusiva tecnología de detección de células StainFree pendiente de patente que le permite realizar ensayos de proliferación celular, citotoxicidad y otros ensayos sin tinciones nucleares como DAPI, que se intercala en el ADN, o colorantes de células vivas que son realmente tóxicos para las células a largo plazo.