Contador de células
En el contador de células: Células THP-1
Obtenida a partir de la sangre de un paciente con leucemia monocítica aguda hace más de 40 años, la línea celular monocítica humana THP-1 se utiliza mucho para estudiar la función de monocitos y macrófagos, así como en la investigación de la leucemia. Normalmente, las células THP-1 crecen en suspensión, pero se puede inducir su diferenciación en células de tipo macrófagos adherentes que expresan IL-8 y otros marcadores, por lo que pueden servir como sistema modelo de diferenciación.
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Figura 1: Recuentos StainFree y nuclear fluorescente de células THP-1 indiferenciadas
Las células THP-1 sembradas a densidades que oscilaban entre 156 y 20 000 células por pocillo se contaron el día después de su siembra con la tecnología StainFree (círculos azules) o se contaron los núcleos después de la tinción con el colorante EarlyTox Live Red (círculos rojos). Los recuentos celulares obtenidos con ambos métodos diferían en un 5 % o menos en todas las densidades de células.
Figura 2: Imágenes de las células THP-1 indiferenciadas adquiridas en el citómetro MiniMax
A, células THP-1 teñidas con el colorante EarlyTox Live Red. B, Máscaras púrpura que muestran las células identificadas por el software SoftMax Pro en el canal de adquisición de imágenes fluorescente rojo. C, Imágenes de las células adquiridas en el canal de LT. D, Células identificadas mediante el análisis StainFree en el canal de LT.
Figura 3: Evolución temporal de la diferenciación de THP-1
Las células THP-1 se sembraron a 20 000 células por pocillo en una placa de 96 pocillos de paredes negras y fondo transparente. Las células se trataron con 25 ng/µl de PMA o con DMSO control. Se tomaron imágenes de las células el día 0, el día 1 después de la adición y el día 2 después de la adición. La flecha amarilla indica una célula diferenciada con morfología adherente aplanada.
Figura 4: Proliferación de células THP-1
La proliferación celular se midió en células tratadas con PMA o con DMSO utilizando la tecnología StainFree. El tratamiento con PMA inhibe la proliferación celular, aunque las células control continúan dividiéndose.
Figura 5: ELISA de IL-8
La concentración de IL-8 se midió mediante ELISA en células THP-1 tratadas con PMA o con DMSO. Las células se sembraron a 24 000 células por pocillo y se recogieron los sobrenadantes para el ensayo 48 horas después de que se iniciara el tratamiento. La absorbancia del ELISA de IL-8 se midió en un lector de microplacas SpectraMax i3.
Consejo:
Para las células en suspensión, como las células THP-1 indiferenciadas, puede usar un tiempo de exposición más bajo para minimizar las imágenes borrosas debido al movimiento de flotación de las células. El citómetro con adquisición de imágenes SpectraMax MiniMax 300 es capaz de cambiar las longitudes de onda muy rápidamente, lo que minimiza la cantidad de movimiento de las células que podría ocurrir entre imágenes, con lo que se consigue un mejor solapamiento de las imágenes tomadas en los diferentes canales. La configuración de análisis de imágenes con LT predefinida “CellsC” (Células C) funciona bien para células en suspensión con morfología redondeada, mientras que “CellsA” (Células A) identifica con más exactitud las células diferenciadas más aplanadas.
Kit de herramientas de análisis de células THP-1
- Plataforma de detección de microplacas multimodo SpectraMax® i3
- Citómetro con adquisición de imágenes SpectraMax® MiniMax™ 300
- Software SoftMax® Pro
Configuración del instrumento para la adquisición de imágenes y recuento de células
Tipo de análisis: “Discrete Object Analysis” (Análisis de objetos definidos)
Longitud de onda para la búsqueda de objetos: LT o 713
Acerca de la tecnología de detección de células StainFree
Los ensayos basados en la adquisición de imágenes celulares normalmente requieren el uso de sondas fluorescentes que pueden ser tóxicas o funcionar únicamente en células fijadas. Un método sin marcaje para analizar recuentos celulares y la confluencia celular permite a los investigadores monitorizar cuantitativamente la proliferación celular y la salud de las células sin necesidad de flujos de trabajo laborioso que pueden alterar la viabilidad celular.
La plataforma de microplacas multimodo SpectraMax i3 con el citómetro con adquisición de imágenes MiniMax 300 utiliza la exclusiva tecnología de detección de células StainFree pendiente de patente que le permite realizar ensayos de proliferación celular, citotoxicidad y otros ensayos sin tinciones nucleares como DAPI, que se intercala en el ADN, o colorantes de células vivas que son realmente tóxicos para las células a largo plazo.