Neurite Outgrowth

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Simplifique la caracterización de neuronas usando el ensayo de crecimiento axonal para estudiar el desarrollo y degeneración neuronal in vitro

Las neuronas crean conexiones a través de extensiones de su cuerpo celular denominadas axones y dendritas, que reciben el nombre común de “procesos”. Este fenómeno biológico se conoce como crecimiento axonal y está regulado por complejos procesos de señalización intracelular.

El crecimiento axonal es un ensayo utilizado frecuentemente para estudiar el desarrollo y la degeneración neuronal in vitro. El desarrollo de axones requiere una interacción compleja de señales intracelulares y extracelulares. El crecimiento de los axones puede estimularse o inhibirse mediante factores neurotróficos. Es importante destacar que el desarrollo de las neuronas puede verse afectado por compuestos químicos neurotóxicos.

Entender los mecanismos de señalización que conducen al crecimiento axonal proporciona valiosa información sobre respuestas neurotóxicas, y datos de cribado de compuestos y para la interpretación de factores que influyen en el desarrollo y regeneración neuronal. La inhibición o estimulación del crecimiento axonal está implicada en una gran variedad de trastornos o lesiones del SNC, como el accidente cerebrovascular, la enfermedad de Parkinson, la enfermedad de Alzheimer y lesiones medulares.

Solución de flujo de trabajo para el análisis del crecimiento axonal

El crecimiento axonal se evalúa mediante la segmentación y cuantificación de los procesos neuronales. Se pueden adquirir imágenes de estos procesos neuronales utilizando un microscopio de fluorescencia y cuantificarse mediante rastreo y recuento manuales cuando el rendimiento es bajo. Sin embargo, para muestras en un formato de microplaca de más alto rendimiento, un sistema de adquisición de imágenes automático combinado con el software de análisis es una solución más eficiente.

Flujo de trabajo para axones

El flujo de trabajo ilustra un proceso simplificado para el análisis del crecimiento axonal y se destacan los sistemas que le ayudan a optimizar sus investigaciones e incrementar su rendimiento.

  1. Cultivar células neuronales: Las células se crecieron y se dejó que formaran redes de axones en microplacas de 96 o 384 pocillos.
  2. Tratar con compuestos: A continuación, las células se expusieron a compuestos tóxicos durante 48 horas.
  3. Teñir los marcadores: Una vez finalizado el tratamiento con compuestos, se pueden añadir las tinciones de células vivas directamente a los medios. Los protocolos de inmunotinción con anticuerpos conjugados con fluorescencia pueden realizarse también después de fijar las células.
  4. Adquirir imágenes neuronales: La adquisición de imágenes de alto contenido de neuronas permite a los científicos caracterizar y medir cambios en las redes neuronales, como el número y longitud de los axones, y ramificaciones, así como determinar las reacciones de toxicidad global o específica. La adquisición de imágenes con una óptica de campo de visión amplio permite muestrear más células con menos sitios por pocillo, lo que conlleva tiempos de adquisición de la placa considerablemente más cortos.
  5. Analizar la red neuronal: El análisis de alto contenido proporciona un método cuantitativo para determinar los efectos de factores positivos y negativos sobre el crecimiento axonal. Utilice el software de análisis de imágenes celulares para realizar análisis cuantitativos de las imágenes de las células neuronales que permitan caracterizar varios patrones, como el número de procesos por célula, la longitud del crecimiento axonal, las ramificaciones y el número de células.

Aplicaciones y ensayos de crecimiento axonal

La adquisición de imágenes de alto contenido de neuronas permite a los científicos caracterizar y medir cambios en las redes neuronales, como el número y longitud de los axones, y ramificaciones, así como determinar las reacciones de toxicidad global o específica.

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