Plásmidos AAV
¿Qué son los plásmidos AAV?
El AAV (virus adenoasociado), un pequeño virus muy frecuente en bioproducción, se ve favorecido por su limitada replicación y su reducida inmunogenicidad en seres humanos. La producción de vectores víricos de alta calidad para transferencia génica exige un proceso complejo de biotransformación, que abarca la producción de ADN plasmídico y otros pasos intrincados.
Flujo de trabajo para la producción de plásmidos AAV
- Cultivo celular: Construcción del vector de ADN de AAV y expansión del plásmido. Preparación y amplificación de plásmidos que codifican todos los factores necesarios para generar partículas de AAV recombinante.
- Adaptación de las condiciones de cultivo: Optimizar los sistemas de cultivo en suspensión o adherente, incluidos formatos 3D o 2D, dependiendo de los requisitos del proceso.
- Producción de vectores AAV: Introducir el ADN del vector AAV en las células de forma transitoria o establecer líneas celulares estables durante 2-3 días de replicación y expresión.
- Recuperación de AAV: Filtrar y centrifugar el medio de cultivo celular para eliminar los restos celulares y concentrar los vectores AAV. Se puede utilizar la filtración de flujo tangencial (TFF) para una mayor purificación. La captura y recuperación de partículas de AAV a partir de medios de cultivo o lisados celulares sigue técnicas estándar utilizadas para proteínas recombinantes que incluyen precipitación, centrifugación, cromatografía y filtración de flujo tangencial.
- Purificación de AAV: Utilizar ultracentrifugación y cromatografía, por ejemplo de afinidad o de intercambio iónico, para obtener preparaciones del vector AAV de alta pureza. Mantener el control de calidad a lo largo de todo el proceso.
- Titulación de AAV: Se puede realizar un análisis de la cantidad y calidad del vector AAV para identificar el título más alto tras las técnicas estándar, como PCR en tiempo real.
- Transducción de células de mamífero: Las partículas de AAV purificadas se pueden utilizar para la transducción de líneas celulares de mamífero de interés, como iPSC, organoides 3D y terapia con células CAR-T.
- Cribado y selección de clones: El cribado de clones es necesario para identificar los clones transducidos con éxito. La selección de clones de alto valor y el enriquecimiento de la mezcla se pueden realizar tras los métodos automatizados de alto rendimiento.
- Resolución de la heterogeneidad y aislamiento de células individuales: La heterogeneidad de la mezcla clonal se resuelve mediante técnicas de aislamiento de células individuales, junto con un análisis basado en imágenes, lo que garantiza la prueba de monoclonalidad de la línea celular transducida con AAV establecida.
- Expansión y caracterización: La posterior caracterización de la línea celular de interés se puede realizar mediante soluciones automatizadas de adquisición de imágenes de alto contenido y ensayos de tipo ELISA.
Soluciones innovadoras para optimizar su flujo de trabajo de producción de plásmidos AAV
En Molecular Devices, entendemos la complejidad de la producción de plásmidos AAV. Nuestro paquete de soluciones tecnológicas avanzadas está meticulosamente diseñado para respaldar y optimizar cada fase de su flujo de trabajo. Centrándonos en la precisión, la eficacia y la adaptabilidad, nos dedicamos a impulsar la excelencia en cada etapa de su proceso de producción de plásmidos AAV, garantizando que su empresa logra resultados líderes en la industria.
Selectores de colonias microbianas QPix™
Aplicación en el flujo de trabajo de AAV:
- Utilizado en la fase de construcción del vector de ADN de AAV y expansión del plásmido.
- Selecciona de forma eficaz colonias que contienen la construcción plasmídica deseada.
- Se puede utilizar para el cribado de colonias con fenotipos específicos, garantizando que se selecciona la construcción plasmídica correcta.
Características:
- Selecciona hasta 3000 colonias por hora.
- Admite diversos microorganismos y modalidades de selección.
- Garantiza la esterilidad con la higienización con luz UV y el lavado de sondas.
- Ofrece varios modo de adquisición de imágenes para la selección precisa de colonias.
- Proporciona funciones automatizadas de siembra y estriado.
- Opciones de automatización adaptables para diversas necesidades de rendimiento.
Selector de colonias de mamífero ClonePix™
Aplicación en el flujo de trabajo de AAV:
- Utilizado en la fase de cribado y selección de clones.
- Realiza cribados y selecciona clones de alto valor en función de la productividad de proteínas y otros atributos.
Características:
- Sistema automatizado para la selección de clones de alto valor.
- Aumenta la probabilidad de encontrar líneas celulares óptimas.
- Ofrece diferentes métodos de detección, incluido la fluorescencia.
- Mantiene la esterilidad con luz UV y el lavado de sondas.
- Utiliza medios semisólidos para la formación de colonias discretas.
CloneSelect™ Imager FL
Aplicación en el flujo de trabajo de AAV:
- Utilizado en la fase de expansión y caracterización.
- Permite la adquisición y el análisis de imágenes de células de mamífero y la garantía de monoclonalidad.
- Se puede utilizar para verificar ediciones génicas.
Características:
- Ofrece adquisición de imágenes tanto de luz blanca como de fluorescencia.
- Genera automáticamente análisis de confluencia y garantía de monoclonalidad.
- Tiempos cortos de adquisición, con capacidad para adquirir imágenes de una placa de 96 pocillos en menos de dos minutos.
- Compatible con diferentes tipos de células, incluidas CHO, HEK e iPSC.
- Proporciona imágenes de alta resolución y análisis inteligente.
Dispensador de células individuales DispenCell™
Aplicación en el flujo de trabajo de AAV:
- Utilizado en la fase de resolución de la heterogeneidad y aislamiento de células individuales.
- Dispensa células individuales, lo que garantiza la monoclonalidad de la línea celular transducida con AAV establecida.
Características:
- Proporciona prueba de monoclonalidad inmediata y trazable.
- La delicada manipulación mantiene la viabilidad celular.
- El diseño compacto se adapta a diferentes entornos de laboratorio.
- Utiliza una punta desechable para evitar la contaminación cruzada.
- Interfaz intuitiva que no requiere calibración.