Inmunotransferencia

¿Qué es la inmunotransferencia?

La inmunotransferencia es una técnica popular utilizada para la detección y cuantificación de proteínas. Permite separar e identificar una proteína de interés específica a partir de una mezcla compleja de proteínas, por ejemplo, un lisado celular. La inmunotransferencia tiene aplicaciones en ámbitos como el diagnóstico, la biotecnología, la biología molecular o la proteómica, entre otros, y se usa mucho para evaluar los niveles de expresión proteica en las células, así como los cambios en el tamaño y otras propiedades.

Métodos de inmunotransferencia

Existen varios métodos de inmunotransferencia que se pueden considerar en función del anticuerpo secundario que se utilice; la detección de la proteína diana puede ser colorimétrica, quimioluminiscente o fluorescente. Estos métodos se describen a continuación y requieren diferentes equipos para su detección. La quimioluminiscencia, por ejemplo, puede detectarse usando placas radiográficas o equipos de adquisición de imágenes digitales, mientras que para un anticuerpo secundario fluorescente se necesita un generador de imágenes de fluorescencia. Cada tipo de detección tiene ventajas e inconvenientes que deben ponderarse a la hora de seleccionar un método.

Otro método que hemos introducido, el sistema de detección ScanLater™ Western Blot, permite una novedosa detección de inmunotransferencias en una plataforma de lector de microplacas multimodo. Utilizando este ensayo sin sustrato, los investigadores pueden conseguir una sensibilidad equivalente a la de los ensayos con quimioluminiscencia tradicionales, consolidando al mismo tiempo las aplicaciones de inmunotransferencia, ELISA y otras aplicaciones en un único lector. A continuación, se proporciona información más detallada en nuestras notas de aplicación destacadas.

El sistema de detección ScanLater™ Western Blot permite la detección de inmunotransferencias en el lector de microplacas

Flujo de trabajo del ensayo de inmunotransferencia

Estos son los pasos para un ensayo de inmunotransferencia típico:

Flujo de trabajo del ensayo de inmunotransferencia

1. Realizar la electroforesis: en primer lugar se separan las proteínas por tamaño mediante electroforesis en gel.

2. Transferir: a continuación, se transfieren a una membrana de transferencia, normalmente de nitrocelulosa o PVDF, que se incuba con un anticuerpo primario específico de la proteína de interés.

3. Bloquear con tampón de bloqueo: esto evita la unión del anticuerpo primario (del paso anterior) a la propia membrana.

4. Incubar con el anticuerpo primario: el anticuerpo primario se une a la proteína diana.

5. Lavar con tampón de lavado: el anticuerpo primario no unido se elimina mediante lavado.

6. Incubar con el anticuerpo secundario: se añade un anticuerpo secundario que reconoce y se une al anticuerpo primario. Este anticuerpo secundario está conjugado con una enzima u otro material que permite la detección de la proteína de interés, la cual aparecerá como una banda en la transferencia.

7. Lavar con tampón de lavado: el anticuerpo secundario no unido se elimina mediante lavado.

8. Detectar usando el método o reacción química de elección: la proteína diana se puede detectar mediante métodos colorimétricos, fluorescentes o luminiscentes, dependiendo del anticuerpo secundario utilizado.

Recursos más recientes

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