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Ensayos de detección de contaminantes

Bajo la marca Threshold, hay disponibles dos kits de ensayo de detección de contaminación: ensayo Threshold® Immunoligand (ILA) y ensayo Threshold® Total DNA

El ensayo Threshold Immunoligand mide una gran variedad de analitos, como proteínas, péptidos, ADN específico de secuencia y microorganismos para el desarrollo y producción de productos biofarmacéuticos. Las muestras pueden variar desde sobrenadantes de fermentación, muestras de un proceso de purificación y otras preparaciones bioquímicas, hasta suero u otros líquidos corporales. Los ensayos se pueden desarrollar usando un formato tipo sándwich o competitivo, dependiendo del tamaño y las características del analito que se mide.

El ensayo Threshold Total DNA mide cuantitativamente picogramos de ADN monocatenario. A diferencia de las técnicas de hibridación que requieren sondas o cebadores de ADN con una secuencia de ácidos nucleicos específica, el ensayo Threshold Total DNA mide el ADN con una especificidad amplia de secuencia. Esto permite al sistema Threshold medir el ADN de células huésped, así como otro ADN que podría haber sido introducido durante el proceso de fabricación de productos biofarmacéuticos. Además, puesto que el ensayo no requiere sondas ni cebadores específicos de secuencia, se puede aplicar fácilmente a diferentes muestras purificadas a partir de diferentes organismos huésped.

Tecnología de los ensayos de detección de contaminantes

  • Ensayo Threshold® Immunoligand (ILA)

    Ensayo Threshold Immunoligand (ILA)

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    En la fase de reacción, los anticuerpos marcados, la muestra que contiene el analito, la estreptavidina y el conjugado antifluoresceína/ureasa proporcionados en el kit de detección ILA se incuban para formar un complejo de reacción. Puesto que esta unión se produce en solución, todas las moléculas se mantienen en su conformación nativa para garantizar la medición exacta del analito y el 100 % de actividad de los anticuerpos. De forma similar, en el ensayo Total DNA se forma un complejo de reacción cuando la proteína biotinilada de unión a ADN monocatenario y el anticuerpo anti-ADNmc, conjugado con ureasa, se unen sin especificidad de secuencia al ADN monocatenario. Todos los componentes del ensayo se incluyen en el kit de ensayo Total DNA completo.

    Durante la fase de separación, se utiliza la fuerte afinidad de la estreptavidina por la biotina para capturar y concentrar los complejos de reacción sobre una membrana biotinilada mediante un paso de filtración. La estación de trabajo Threshold contiene cuatro unidades de filtración de 8 canales con la posibilidad de añadir dos colectores auxiliares para una filtración simultánea total de 96 muestras.

    En la fase de detección, el complejo de reacción capturado sobre la membrana se coloca en el lector Threshold que contiene el sustrato urea y el sensor potenciométrico direccionable por luz (light-addressable potentiometric sensor, LAPS). Dentro del lector, la urea es hidrolizada por la ureasa, produciendo un cambio de pH en un microvolumen de menos de 1 µl. El sensor detecta simultáneamente la actividad ureasa de ocho muestras diferentes durante una medición cinética de 90 segundos. La extrema sensibilidad, precisión y reproducibilidad del sistema Threshold® se debe a la combinación del pequeño volumen de muestra con el sensor de bajo ruido.

    Ensayo Threshold® Total DNA

    Ensayo Threshold Total DNA

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    En la fase de reacción, los anticuerpos marcados, la muestra que contiene el analito, la estreptavidina y el conjugado antifluoresceína/ureasa proporcionados en el kit de detección ILA se incuban para formar un complejo de reacción. Puesto que esta unión se produce en solución, todas las moléculas se mantienen en su conformación nativa para garantizar la medición exacta del analito y el 100 % de actividad de los anticuerpos. De forma similar, en el ensayo Total DNA se forma un complejo de reacción cuando la proteína biotinilada de unión a ADN monocatenario y el anticuerpo anti-ADNmc, conjugado con ureasa, se unen sin especificidad de secuencia al ADN monocatenario. Todos los componentes del ensayo se incluyen en el kit de ensayo Total DNA completo.

    Durante la fase de separación, se utiliza la fuerte afinidad de la estreptavidina por la biotina para capturar y concentrar los complejos de reacción sobre una membrana biotinilada mediante un paso de filtración. La estación de trabajo Threshold contiene cuatro unidades de filtración de 8 canales con la posibilidad de añadir dos colectores auxiliares para una filtración simultánea total de 96 muestras.

    En la fase de detección, el complejo de reacción capturado sobre la membrana se coloca en el lector Threshold que contiene el sustrato urea y el sensor potenciométrico direccionable por luz (light-addressable potentiometric sensor, LAPS). Dentro del lector, la urea es hidrolizada por la ureasa, produciendo un cambio de pH en un microvolumen de menos de 1 µl. El sensor detecta simultáneamente la actividad ureasa de ocho muestras diferentes durante una medición cinética de 90 segundos. La extrema sensibilidad, precisión y reproducibilidad del sistema Threshold® se debe a la combinación del pequeño volumen de muestra con el sensor de bajo ruido.

Recursos de los ensayos de detección de contaminantes