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Descripción general de los ensayos IMAP - Enzimas

Basada en la interacción específica de alta afinidad de los grupos fosfato con nanopartículas (microesferas) que contienen metal trivalente, IMAP es una plataforma genérica no basada en anticuerpos que permite evaluar las actividades de quinasas, fosfatasas y fosfodiesterasas. Se lleva a cabo una reacción enzimática utilizando sustratos marcados con fluorescencia. La adición del sistema de unión IMAP detiene la reacción enzimática e inicia la unión de las microesferas a los sustratos fosforilados. La unión del sustrato a las microesferas, que se correlaciona con la actividad enzimática, se puede detectar usando PF o TR-FRET como lectura.

Sistema de unión progresiva IMAP

Sustratos de IMAP

Datos de los ensayos IMAP

  • Ejemplo de datos de IMAP: curva de dilución de ROCKII

    Ejemplo de datos de IMAP PF: curva de dilución de ROCKII

    Curvas de dilución de la enzima ROCKII en tampón de reacción de IMAP con BSA y con Tween usando el sistema de unión progresiva. Condiciones de reacción: Quinasa ROCKII (Upstate: 14-451) según lo indicado, sustrato derivado de FAM-S6 100 nM (5FAM-AKRRRLSSLRA-COOH, R7184), ATP 100 µM. Condiciones de la solución de unión IMAP: tampón de unión A al 100 %, reactivo de unión progresiva 1:400.

  • Detección PF frente a TR-FRET

    Inhibición de Akt con estaurosporina: Comparación de la detección IMAP TR-FRET (superior) e IMAP PF (inferior). Condiciones de reacción: Quinasa Akt (0,1 U/ml, Upstate: 14-276), FAM-Crosstide 300 nM, 1 µM, 3 µM (5FAM-GRPRTSSFAEG-COOH, R7110), ATP 10 µM, estaurosporina según lo indicado. Solución de unión IMAP: tampón de unión A al 40 %, tampón de unión B al 60 %, reactivo de unión progresiva 1:400.

    Detección PF frente a TR-FRET

Tecnología de los ensayos IMAP - Enzimas

  • Ensayos genéricos de quinasas y fosfatasas IMAP PF

    Ensayos genéricos de quinasas y fosfatasas IMAP PF

    Principio de IMAP usando la lectura de PF: La solución de unión se añade después de la reacción de la quinasa usando un péptido marcado con fluorescencia. El pequeño sustrato fluorescente fosforilado se une a las nanopartículas grandes a base de M(III) que reduce la velocidad rotacional del sustrato y así incrementa su polarización.

    Ensayos genéricos de fosfodiesterasas IMAP PF

    Ensayos genéricos de fosfodiesterasas IMAP PF

    Principio de IMAP usando la lectura de PF: La solución de unión se añade después de la reacción de la fosfodiesterasa usando un sustrato marcado con fluorescencia. El pequeño sustrato fluorescente fosforilado se une a las nanopartículas grandes a base de M(III) que reduce la velocidad rotacional del sustrato y así incrementa su polarización.

  • Ensayos genéricos de quinasas y fosfatasas IMAP TR-FRET

    Ensayos genéricos de quinasas y fosfatasas IMAP TR-FRET

    Principio IMAP usando la lectura de TR-FRET: La solución de unión se añade después de la reacción de la quinasa usando un péptido o proteína marcado con fluorescencia. En este sistema, las nanopartículas están enriquecidas con una molécula donadora de terbio (Tb). Mediante la unión a las nanopartículas a base de M(III) enriquecidas, el sustrato fluorescente fosforilado entra en estrecha proximidad con el donador de Tb, lo que permite la medición del TR-FRET entre el donador de Tb y el sustrato fluorescente fosforilado.

    Ensayos genéricos de fosfodiesterasas IMAP TR-FRET

    Ensayos genéricos de fosfodiesterasas IMAP TR-FRET

    Principio IMAP usando la lectura de TR-FRET: La solución de unión se añade después de la reacción de la fosfodiesterasa usando un sustrato marcado con fluorescencia. En este sistema, las nanopartículas están enriquecidas con una molécula donadora de terbio (Tb). Mediante la unión a las nanopartículas a base de M(III) enriquecidas, el sustrato fluorescente fosforilado entra en estrecha proximidad con el donador de Tb, lo que permite la medición del TR-FRET entre el donador de Tb y el sustrato fluorescente fosforilado.

Opciones de pedido de los ensayos IMAP - Enzimas

Kit de ensayo IMAP

Kit IMAP Evaluation Demo - Ref.: R8166

Kit IMAP Evaluation Demo
Kit IMAP optimizado de 800 puntos de datos que incluye calibradores (péptidos fosforilados y no fosforilados) para procesar una curva de calibración para la detección mediante PF o TR-FRET

N.º R8166

$779.00 USD

1

Kit IMAP TR-FRET Evaluation (con sistema de unión progresiva) - Ref.: R8161

Kit IMAP TR-FRET Evaluation con sistema de unión progresiva
Protocolo de 800 puntos de datos para procesar el ensayo IMAP con el sistema de unión progresiva; se necesitan quinasa y sustrato adicionales

N.º R8161

$779.00 USD

1

Kit IMAP FP PDE Evaluation - Ref.: R8175

Kits IMAP FP PDE Evaluation

N.º R8175

$1,427.00 USD

1

Kit IMAP TR-FRET PDE Evaluation (con sustratos cAMP y cGMP) - Ref.: R8176

Kits IMAP TR-FRET PDE Evaluation
Incluye un protocolo optimizado, sustratos cAMP y cGMP; el cliente proporciona su propia enzima PDE

N.º R8176

$1,427.00 USD

1

Recursos de los ensayos IMAP - Enzimas