Kit de ensayo de captación de ácidos grasos QBT
Los protocolos convencionales para la monitorización de la captación de ácidos grasos usando radioactividad a menudo requieren de la lisis celular y el procesamiento a muy baja temperatura, lo que les hace caros, lentos e inadecuados para el cribado de alto rendimiento. Otros protocolos basados en fluorescencia generalmente requieren el uso de instrumentos de clasificación de células activadas por fluorescencia (FACS) de bajo rendimiento, o requieren del lavado de las células, lo que puede comprometer gravemente la integridad de los frágiles adipocitos utilizados en estos ensayos.
El ensayo QBT Fatty Acid Uptake utiliza el análogo de ácido graso fluorescente BODIPY®-ácido dodecanoico acoplado con nuestra tecnología de extinción de señal patentada. El marcaje BODIPY proporciona un análogo de ácido graso de cadena larga ideal que se comporta de forma muy similar a los ácidos grasos naturales y es un conocido sustrato de los transportadores de ácidos grasos.
- El formato de ensayo homogéneo de un solo paso permite el cribado de alto rendimiento
- El ensayo fluorescente con tecnología de extinción de señal patentada permite a los usuarios monitorizar la cinética de captación en tiempo real en células vivas
- Sustituye a los engorrosos y laboriosos protocolos de ensayo con fluorescencia y radioactividad
- Al prescindir de los compuestos radioactivos se reducen los costes de eliminación del material y se eliminan los riesgos para la seguridad asociados a los ensayos radioactivos
Datos del kit de ensayo QBT Fatty Acid Uptake
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Fibroblastos frente a adipocitos
Se sembraron adipocitos 3T3 L1 a una concentración de 50 000 células/pocillo en 100 µl de DMEM/FBS en una placa de 96 pocillos y se incubaron a 37 °C durante 5 horas. A continuación, se sustituye el medio de crecimiento por la solución de captación de ácidos grasos. Las lecturas cinéticas se iniciaron inmediatamente con un lector FlexStation® 3 de Molecular Devices. A: adipocitos; B: fibroblastos; C: sin células (solo reactivo de captación).
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Fibroblastos frente a adipocitos; dosis-respuesta a insulina
Se sembraron adipocitos 3T3 L1 a una concentración de 50 000 células/pocillo en 100 µl de DMEM/FBS en una placa de 96 pocillos y se incubaron a 37 °C durante 5 horas; a continuación, se cultivaron sin suero durante 1 hora. Se añadieron diferentes concentraciones de insulina a los pocillos y se incubaron durante 30 minutos en un incubador a 37 °C con 5 % de CO2. Al finalizar el tiempo de incubación, se añadieron 100 µl de una mezcla de ácidos grasos a los pocillos y se iniciaron inmediatamente las lecturas cinéticas con un lector FlexStation 3. Las líneas A a F corresponden a adipocitos con 160, 16, 8, 1,6, 0,16 y 0 nM de insulina, respectivamente; las líneas G y H corresponden a fibroblastos con 0 y 160 nM de insulina, respectivamente.
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Efecto inhibidor de la leptina
Se plantaron adipocitos 3T3 L1 a una concentración de 50 000 células/pocillo/100 µl de DMEM/FBS en una placa de 96 pocillos durante 5 horas; a continuación, se cultivaron sin suero durante 1 hora con o sin leptina (100 nM). Se añadió la insulina a 10 nM a los pocillos y se incubaron durante 30 minutos más en un incubador a 37 °C y 5 % de CO2. Al finalizar el tiempo de incubación, se añadieron 100 µl de ácido graso a los pocillos y se iniciaron inmediatamente las lecturas cinéticas con un lector FlexStation 3. Datos cortesía de Cambridge Biotechnology. A: insulina, B: insulina y leptina, C: basal.
Tecnología del kit de ensayo QBT Fatty Acid Uptake
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Principio del ensayo
El kit de ensayo QBT Fatty Acid Uptake incluye un tampón de carga que contiene un análogo de ácido graso fluorescente, junto con un colorante de extinción de señal para reducir en gran medida la fluorescencia en el espacio extracelular. Cuando se añade el tampón de carga a las células, el transporte del análogo de ácido graso fluorescente dentro de la célula da lugar a un aumento de la señal de fluorescencia que se monitoriza en tiempo real usando un lector de microplacas de fluorescencia con lectura del fondo del pocillo. La inhibición del transporte de ácidos grasos por los compuestos problema da lugar a una reducción de la señal fluorescente con respecto a los controles.
Recursos del kit de ensayo QBT Fatty Acid Uptake
eBook
Ensayos optimizados para una investigación pionera
Optimized Assays for Breakthrough Research
La investigación en biología se ha simplificado considerablemente gracias a la disponibilidad de kits de ensayo, instrumentos y protocolos de ensayo estandarizados de fabricantes comerciales.
Póster científico
Cuantificación de la captación de ácidos grasos en células HepG2 y adipocitos usando el ensayo QBT™ Fatty Acid Uptake
Quantification of Fatty Acid Uptake in HepG2 Cells and Adipocytes Using the QBT™ Fatty Acid Uptake Assay
En este póster demostramos que el ensayo QBT Fatty Acid Uptake es muy adecuado para el análisis de la captación de AGCL en otros tipos de células de mamífero, así como en los adipocitos mostrados previamente. La…
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Póster científico
Aportando la relevancia de las células primarias al cribado: Células inmortalizadas de forma condicionada Clonetics y el ensayo QBT™ Fatty Acid Uptake para el cribado de alto rendimiento
Bringing Primary Cell Relevance to Screening: Clonetics Conditionally Immortalized Cells and QBT™ Fatty Acid Uptake Assay for High Throughput Screening
En este documento se describe cómo el kit de ensayo QBT Fatty Acid Uptake proporciona un ensayo in vitro homogéneo de un solo paso para su uso en HTS y en la investigación de enfermedades metabólicas. Descargar para saber más...
Hoja de datos
Kit de ensayo de captación de ácidos grasos QBT
QBT Fatty Acid Uptake Assay Kit
El kit de ensayo QBT Fatty Acid Uptake permite la cinética de captación en tiempo real y es muy adecuado para aplicaciones de cribado de alto rendimiento. Lea esta hoja de datos para explorar el kit de ácidos grasos QBT...
