Contador de células
En el contador de células: Células CHO
Las células de ovario de hámster chino (CHO) son una línea celular de tipo epitelial utilizada frecuentemente en investigación biológica y médica. Desarrolladas hace más de 50 años, se han utilizado en innumerables estudios, desde genéticos a de citotoxicidad. Son muy susceptibles a la transfección y se han convertido en la línea celular más popular para la producción de proteínas recombinantes, incluidos tratamientos.
Ver el seminario web de detección de células StainFree
Descargar la nota de aplicación de detección de células StainFree
Descargar eBook: Realice recuentos de células de forma profesional
Figura 1. Análisis StainFree de células CHO con el software SoftMax Pro
Las células CHO de estas imágenes se sembraron a una densidad de 4000 células por pocillo en una microplaca de 384 pocillos. Izquierda: Para crear una nueva configuración de análisis StainFree, se utiliza el ratón para “dibujar” sobre la imagen, indicando las células individuales (amarillo) y las áreas sin células (azul). Derecha: Las máscaras púrpura muestran los objetos identificados en la imagen por el software. Alternativamente, se puede utilizar una configuración predefinida de análisis de la imagen para realizar un análisis de los recuentos de células CHO con un solo clic.
Figura 2. Tecnología StainFree comparada con el recuento de células con fluorescencia
Recuento celular usando la tecnología de detección celular StainFree™ (azul), tinción nuclear roja (rojo) y tinción verde de células completas (verde). Los recuentos obtenidos con los tres métodos coinciden bastante, lo que demuestra que la tecnología StainFree proporciona recuentos celulares exactos, eliminando a la vez la necesidad de colorantes fluorescentes (r > 0,99 para cada representación).
Figura 3. Confluencia celular
El porcentaje de confluencia de las células justo antes de la transfección se determinó mediante la tecnología StainFree. Para las densidades de siembra iniciales de 15000, 10000 y 5000 células por pocillo, los porcentajes medidos de confluencia después de crecer durante toda la noche fueron de 44, 30 y 15, respectivamente.
Figura 4. Adquisición de imágenes transfectadas con GFP
Se adquirieron imágenes de las células transfectadas usando los canales de LT (A, C) y de fluorescencia verde (B, D) del citómetro con adquisición de imágenes SpectraMax MiniMax 300. Las células que se muestran se sembraron a 15000 células por pocillo en una placa de 96 pocillos. Se muestran dos condiciones de transfección que representan eficiencias de transfección baja (B) y alta (D). La tecnología StainFree se utilizó para identificar células individuales, que pudieron después clasificarse como positivas o negativas en función de la expresión de GFP.
Consejo 1:
Para contar las células CHO sin tinción, se utiliza la configuración predefinida “Cells A” (Células A) en el software SoftMax Pro. Esto funciona realmente bien en las células CHO que tienen entre el 5 y el 95 % de confluencia. Hemos podido conseguir una excelente correlación entre los recuentos StainFree y los de núcleos fluorescentes de las mismas muestras. (Véanse las figuras 2 y 3).
Consejo2:
Obtención de recuentos StainFree más exactos. Cuando se adquieren imágenes en el canal de LT, en lugar de usar un ajuste de foco alto que ofrece la imagen más nítida posible, intente reducir el ajuste del foco a una posición algo más negativa, por ejemplo, de 0 a -20. Deseará que las células de la imagen tengan centros brillantes y bordes oscuros. Esto le ahorrará mucho tiempo y obtendrá mejores resultados con la configuración de análisis predefinida.
Kit de herramientas de análisis de células CHO
- Plataforma de detección de microplacas multimodo SpectraMax® i3
- Citómetro con adquisición de imágenes SpectraMax® MiniMax™ 300
- Software SoftMax® Pro
Configuración del instrumento
Acerca de la tecnología de detección de células StainFree
Los ensayos basados en la adquisición de imágenes celulares normalmente requieren el uso de sondas fluorescentes que pueden ser tóxicas o funcionar únicamente en células fijadas. Un método sin marcaje para analizar recuentos celulares y la confluencia celular permite a los investigadores monitorizar cuantitativamente la proliferación celular y la salud de las células sin necesidad de flujos de trabajo laborioso que pueden alterar la viabilidad celular.
La plataforma de microplacas multimodo SpectraMax i3 con el citómetro con adquisición de imágenes MiniMax 300 utiliza la exclusiva tecnología de detección de células StainFree pendiente de patente que le permite realizar ensayos de proliferación celular, citotoxicidad y otros ensayos sin tinciones nucleares como DAPI, que se intercala en el ADN, o colorantes de células vivas que son realmente tóxicos para las células a largo plazo.