Recuento de células

Evaluación de la viabilidad celular

La viabilidad celular se puede evaluar examinando parámetros como la integridad de la membrana celular o la actividad de enzimas celulares. En un lector de microplacas, estos parámetros se pueden detectar utilizando reactivos fluorescentes. Por ejemplo, un colorante rojo de unión a ADN impermeable a células solo tiñe células muertas o dañadas cuyas membranas están afectadas, mientras que un colorante verde de células vivas solo emite fluorescencia cuando las enzimas metabólicas están activas.

• Normalización de los ensayos HTRF de citoquinas para viabilidad celular
• Ensayo multiplexado automatizado con adquisición de imágenes para compuestos cardiotóxicos usando el sistema ImageXpress Pico
• Medición de la viabilidad celular y la citotoxicidad con el kit EarlyTox Cell Integrity

Alternativas a la tinción con DAPI

DAPI (4',6-diamino-2-fenilindol) es un colorante fluorescente utilizado a menudo para teñir el ADN nuclear. Se emplea en experimentos de adquisición de imágenes, como microscopía de fluorescencia, extensiones de cromosomas, FACS y ensayos con células. No obstante, la excitación con UV provoca la fotoconversión del DAPI, lo que permite la detección de la fluorescencia DAPI en el canal de FITC/GFP de un sistema de adquisición de imágenes, generando errores en la interpretación de los resultados. El DAPI también requiere fijar las células para lograr la máxima tinción. Aquí mostramos algunas alternativas a la tinción con DAPI, incluida la tecnología StainFree, que no requiere tinción en absoluto y que se puede utilizar con células vivas.

• Alternativas a la tinción con DAPI: adquisición de imágenes y recuento de células vivas
• Recuento de células sin tinción celular
• Desde pocillos a inmunotransferencias: Estudio de la respuesta celular de proteínas de choque térmico
• Tecnología StainFree para el análisis de imágenes celulares sin colorantes fluorescentes

Cálculo de la eficiencia de la transfección

Medir la eficiencia de la transfección proporciona a los investigadores una indicación preliminar del rendimiento de la edición génica antes de utilizar las células modificadas para los ensayos deseados. Se pueden adquirir imágenes de alta calidad tanto con luz transmitida como con un canal de fluorescencia que muestren la transfección de la célula. El software de análisis de imágenes identifica y hace un recuento de cada célula y la puntúa como positiva para GFP o no. Posteriormente, se puede calcular la eficiencia de transfección a partir del cociente.

• Optimización de la transfección de GFP con la plataforma de detección multimodo SpectraMax i3
• Valide células editadas con CRISPR utilizando la adquisición de imágenes y detección de inmunotransferencia en un lector de microplacas.

Análisis del ciclo celular

La transición de una célula a través del ciclo celular se puede monitorizar utilizando proteínas del ciclo celular marcadas con fluorescencia que se expresan y degradan de forma cíclica. La tecnología FUCCI se basa en la sobreexpresión de las proteínas dependientes del ciclo celular geminina y Cdt1, fusionadas respectivamente a un fluoróforo verde y a un fluoróforo rojo. Los niveles de Cdt1 son máximos en la fase G1, por lo que las células en G1 aparecen verdes; los niveles de geminina se elevan en las fases S tardía, G2 y M, por lo que las células en estas fases aparecen rojas.

• Evaluación de inhibidores del ciclo celular mediante un ensayo con células vivas

Migración celular

La migración celular, el movimiento de las células desde una ubicación a otra, es un componente crítico tanto de procesos biológicos normales como anómalos. La migración de las células marcadas con fluorescencia o sin marcar desde una zona a otra del pocillo de una microplaca se puede monitorizar con un sistema de adquisición de imágenes celulares. El software de análisis automático calcula la cantidad de migración celular en cada pocillo.

• Mida la migración celular mediante un simple ensayo de cicatrización de herida con adquisición de imágenes de células vivas con lapso de tiempo
• Mida la migración celular mediante la adquisición discontinua de imágenes de lapso de tiempo de células vivas

Recuento de células con marcadores fluorescentes

Adquiera imágenes y analice los efectos de compuestos en función de la tinción positiva de células con diferentes marcadores fluorescentes. El análisis cuantitativo uniforme y estadísticamente relevante permite analizar múltiples compuestos a diferentes concentraciones. Lea la nota de aplicación si desea más información sobre la diferencia entre el recuento de células con adquisición de imágenes de fluorescencia o luz transmitida.

• Realice recuentos de células con o sin marcajes fluorescentes usando la adquisición automática de imágenes

Recuento de células con luz transmitida

Los algoritmos de segmentación (análisis) con luz transmitida aumentan la exactitud del recuento de diversos tipos de células y normalmente se utilizan para adquirir imágenes de células vivas sin teñir o de células fijadas, además de los métodos convencionales de recuento de células para detectar cuerpos celulares o núcleos fluorescentes. Vea el vídeo para descubrir cómo puede configurar los parámetros para llevar a cabo la puntuación de células con luz transmitida.

• Análisis de imágenes de luz transmitida para el recuento de células y la evaluación de efectos citotóxicos
• Método mejorado de recuento de células usando luz transmitida en el citómetro MiniMax de SpectraMax
• Puntuación celular con luz transmitida en ImageXpress Pico
• Recuento de células con el módulo Transmitted Light Analysis en MetaXpress

Detección de citotoxicidad en células

A menudo se mide la citotoxicidad en respuesta a un tratamiento experimental o un posible fármaco. Tener una forma de detectar fácilmente la citotoxicidad en las células tratadas es fundamental para identificar nuevos tratamientos terapéuticos o para entender las vías de señalización celular que afectan a la salud de las células. El nivel de ATP en una población de células y la integridad de las membranas celulares son indicadores frecuentes de citotoxicidad y ambos pueden medirse con una serie de ensayos en microplacas.

• Medición de la salud celular en el lector SpectraMax iD3 con ensayos de viabilidad celular
• Ensayos de hepatotoxicidad de alto contenido multiplexados usando hepatocitos derivados de iPSC
• Análisis de imágenes de luz transmitida para el recuento de células y la evaluación de efectos citotóxicos

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Citometría de imagen

La citometría de imagen es una técnica de recuento de células que combina la microscopía de bajo aumento con herramientas de adquisición y análisis de imágenes. La citometría de imagen es útil porque puede proporcionar información sobre una amplia variedad de características celulares en una gran población de células en un único ensayo. La citometría de imagen se puede utilizar en células sin marcar o marcadas con fluorescencia y se pueden realizar muchas veces en una población para obtener información sobre la dinámica celular a lo largo del tiempo.