Métodos y técnicas de recuento de células
Recuento de células mediante la adquisición automática de imágenes celulares
El recuento de células es fundamental y crítico para numerosos experimentos biológicos. Ensayos como los de toxicidad de compuestos farmacológicos, proliferación celular e inhibición de la división celular dependen de la evaluación del número o de la densidad de las células en un pocillo. La adquisición automática de imágenes puede acelerar considerablemente el proceso de recuento de células, reduciendo así el trabajo manual y los errores humanos.
El siguiente ejemplo de flujo de trabajo muestra cómo el usuario puede colocar simplemente la muestra en el sistema de adquisición automática de imágenes celulares ImageXpress® Pico y, tras una sencilla configuración del software, el sistema hace un recuento automático de las células, lo que permite a los usuarios disponer de tiempo. Se pueden hacer recuentos de células con diversos métodos, como el recuento de células sin marcar con luz transmitida o la detección de un colorante nuclear con la adquisición de imágenes de fluorescencia.

Tecnología de detección de células StainFree: un método sin marcaje para analizar recuentos celulares y la confluencia celular
Los ensayos basados en la adquisición de imágenes celulares normalmente requieren el uso de sondas fluorescentes que pueden ser tóxicas o funcionar únicamente en células fijadas. Un método sin marcaje para analizar recuentos celulares y la confluencia celular le permite monitorizar cuantitativamente la proliferación celular y la salud de las células sin necesidad de flujos de trabajo tediosos que puedan alterar la viabilidad celular.
El lector de microplacas multimodo SpectraMax® i3 con el citómetro con adquisición de imágenes SpectraMax® MiniMax™ 300 utiliza la exclusiva tecnología de detección de células StainFree pendiente de patente que le permite realizar ensayos de proliferación celular, citotoxicidad y otros ensayos sin tinciones nucleares como DAPI, que se intercala en el ADN, o colorantes de células vivas que son realmente tóxicos para las células a largo plazo.

Flujo de trabajo para el análisis de células con la tecnología StainFree en comparación con el colorante Live Red y DAPI. El flujo de trabajo StainFree ahorrar hasta 70 minutos en comparación con la fijación y tinción con DAPI. Además, las células analizadas con la tecnología StainFree permanecen completamente viables y se pueden usar en ensayos adicionales.
Recuentos de células con la tecnología StainFree
El algoritmo de detección de células StainFree elimina la tinción de células para el recuento celular y las mediciones de confluencia utilizando una exclusiva tecnología de análisis con luz transmitida (LT). Aquí describimos el análisis de una serie de tipos celulares utilizados frecuentemente usando nuestro método sin marcaje.
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Evaluación de la viabilidad celular
La viabilidad celular se puede evaluar examinando parámetros como la integridad de la membrana celular o la actividad de enzimas celulares. En un lector de microplacas, estos parámetros se pueden detectar utilizando reactivos fluorescentes. Por ejemplo, un colorante rojo de unión a ADN impermeable a células solo tiñe células muertas o dañadas cuyas membranas están afectadas, mientras que un colorante verde de células vivas solo emite fluorescencia cuando las enzimas metabólicas están activas.
Alternativas a la tinción con DAPI
DAPI (4',6-diamino-2-fenilindol) es un colorante fluorescente utilizado a menudo para teñir el ADN nuclear. Se emplea en experimentos de adquisición de imágenes, como microscopía de fluorescencia, extensiones de cromosomas, FACS y ensayos con células. No obstante, la excitación con UV provoca la fotoconversión del DAPI, lo que permite la detección de la fluorescencia DAPI en el canal de FITC/GFP de un sistema de adquisición de imágenes, generando errores en la interpretación de los resultados. El DAPI también requiere fijar las células para lograr la máxima tinción. Aquí mostramos algunas alternativas a la tinción con DAPI, incluida la tecnología StainFree, que no requiere tinción en absoluto y que se puede utilizar con células vivas.
- Alternativas a la tinción con DAPI: adquisición de imágenes y recuento de células vivas
- Recuento de células sin tinción celular
- Desde pocillos a inmunotransferencias: Estudio de la respuesta celular de proteínas de choque térmico
- Tecnología StainFree para el análisis de imágenes celulares sin colorantes fluorescentes
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Cálculo de la eficiencia de la transfección
Medir la eficiencia de la transfección proporciona a los investigadores una indicación preliminar del rendimiento de la edición génica antes de utilizar las células modificadas para los ensayos deseados. Se pueden adquirir imágenes de alta calidad tanto con luz transmitida como con un canal de fluorescencia que muestren la transfección de la célula. El software de análisis de imágenes identifica y hace un recuento de cada célula y la puntúa como positiva para GFP o no. Posteriormente, se puede calcular la eficiencia de transfección a partir del cociente.
Análisis del ciclo celular
La transición de una célula a través del ciclo celular se puede monitorizar utilizando proteínas del ciclo celular marcadas con fluorescencia que se expresan y degradan de forma cíclica. La tecnología FUCCI se basa en la sobreexpresión de las proteínas dependientes del ciclo celular geminina y Cdt1, fusionadas respectivamente a un fluoróforo verde y a un fluoróforo rojo. Los niveles de Cdt1 son máximos en la fase G1, por lo que las células en G1 aparecen verdes; los niveles de geminina se elevan en las fases S tardía, G2 y M, por lo que las células en estas fases aparecen rojas.
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Migración celular
La migración celular, el movimiento de las células desde una ubicación a otra, es un componente crítico tanto de procesos biológicos normales como anómalos. La migración de las células marcadas con fluorescencia o sin marcar desde una zona a otra del pocillo de una microplaca se puede monitorizar con un sistema de adquisición de imágenes celulares. El software de análisis automático calcula la cantidad de migración celular en cada pocillo.
Recuento de células con marcadores fluorescentes
Adquiera imágenes y analice los efectos de compuestos en función de la tinción positiva de células con diferentes marcadores fluorescentes. El análisis cuantitativo uniforme y estadísticamente relevante permite analizar múltiples compuestos a diferentes concentraciones. Lea la nota de aplicación si desea más información sobre la diferencia entre el recuento de células con adquisición de imágenes de fluorescencia o luz transmitida.
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Recuento de células con luz transmitida
Los algoritmos de segmentación (análisis) con luz transmitida aumentan la exactitud del recuento de diversos tipos de células y normalmente se utilizan para adquirir imágenes de células vivas sin teñir o de células fijadas, además de los métodos convencionales de recuento de células para detectar cuerpos celulares o núcleos fluorescentes. Vea el vídeo para descubrir cómo puede configurar los parámetros para llevar a cabo la puntuación de células con luz transmitida.
- Análisis de imágenes de luz transmitida para el recuento de células y la evaluación de efectos citotóxicos
- Método mejorado de recuento de células usando luz transmitida en el citómetro MiniMax de SpectraMax
- Puntuación celular con luz transmitida en ImageXpress Pico
- Recuento de células con el módulo Transmitted Light Analysis en MetaXpress
Detección de citotoxicidad en células
A menudo se mide la citotoxicidad en respuesta a un tratamiento experimental o un posible fármaco. Tener una forma de detectar fácilmente la citotoxicidad en las células tratadas es fundamental para identificar nuevos tratamientos terapéuticos o para entender las vías de señalización celular que afectan a la salud de las células. El nivel de ATP en una población de células y la integridad de las membranas celulares son indicadores frecuentes de citotoxicidad y ambos pueden medirse con una serie de ensayos en microplacas.
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eBook: Realice recuentos de células de forma profesional
Mejore los recuentos de células añadiendo ensayos con adquisición de imágenes celulares en un formato pequeño y eliminando la tinción de células y las mediciones de confluencia con la tecnología de detección de células StainFree™.
Citometría de imagen
La citometría de imagen es una técnica de recuento de células que combina la microscopía de bajo aumento con herramientas de adquisición y análisis de imágenes. La citometría de imagen es útil porque puede proporcionar información sobre una amplia variedad de características celulares en una gran población de células en un único ensayo. La citometría de imagen se puede utilizar en células sin marcar o marcadas con fluorescencia y se pueden realizar muchas veces en una población para obtener información sobre la dinámica celular a lo largo del tiempo.
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Realice recuentos de células con o sin marcajes fluorescentes usando la adquisición automática de imágenes
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Nota de aplicación
Mida la migración celular mediante la adquisición discontinua de imágenes de lapso de tiempo de células vivas
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La migración celular es un proceso esencial necesario para muchos procesos biológicos, como el desarrollo embrionario, la curación de heridas, la metástasis del cáncer y las respuestas inmunológicas.
Nota de aplicación
Ensayo multiplexado automatizado con adquisición de imágenes para compuestos cardiotóxicos usando el sistema ImageXpress Pico
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Evaluación de inhibidores del ciclo celular mediante un ensayo con células vivas
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Valide células editadas con CRISPR utilizando la adquisición de imágenes y detección de inmunotransferencia en un lector de microplacas.
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La migración celular, definida en términos generales como el movimiento de las células desde una ubicación a otra, es importante en diversos procesos, como el desarrollo embrionario y la curación de heridas. También es un...
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Adquisición de imágenes celulares de forma sencilla
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Evaluación multiparamétrica de fenotipos celulares usando el sistema de adquisición automática de imágenes celulares ImageXpress Pico
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La adquisición automática de imágenes celulares es un método eficaz para analizar efectos de compuestos en fenotipos celulares, como morfología, viabilidad y expresión de marcadores.
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Realice recuentos de células de forma profesional
Count Cells Like a Pro
Mejore los recuentos de células añadiendo ensayos con adquisición de imágenes celulares en un formato pequeño y eliminando la tinción de células y las mediciones de confluencia con la tecnología de detección de células StainFree™.
Nota de aplicación
Citotoxicidad en células: Fácil determinación utilizando los ensayos biológicos ViaLight Plus y ToxiLight de Lonza en el luminómetro de microplacas SpectraMax L
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Nota de aplicación
Monitorización de la citotoxicidad en la plataforma SpectraMax i3 con el citómetro MiniMax
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La apoptosis es un proceso importante en el desarrollo embrionario, así como en el cáncer y las enfermedades neurodegenerativas. Los ensayos de apoptosis y viabilidad celular pueden proporcionar información sobre...
Nota de aplicación
Evaluación de la toxicidad mitocondrial en la plataforma de detección multimodo SpectraMax i3 con el citómetro con adquisición de imágenes MiniMax 300
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Una parte fundamental de los programas de cribado de fármacos es la monitorización de los efectos de los fármacos candidatos sobre la salud mitocondrial. La actividad mitocondrial se puede analizar fácilmente con los colorantes fluorescentes disponibles en...
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Desde pocillos a inmunotransferencias: Estudio de la respuesta celular de proteínas de choque térmico
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El estudio de la respuesta celular puede implicar múltiples técnicas para obtener la información, como adquisición de imágenes, ensayos de viabilidad y proliferación con célula, inmunotransferencias para buscar cambios en...
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Alternativas a la tinción con DAPI: adquisición de imágenes y recuento de células vivas
Alternatives to DAPI staining: imaging and counting live cells
DAPI (4',6-diamino-2-fenilindol) es un colorante fluorescente utilizado a menudo para teñir el ADN nuclear. Se emplea en experimentos de adquisición de imágenes, como microscopía de fluorescencia, extensiones de cromosomas, FACS,...
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Tecnología StainFree para el análisis de imágenes celulares sin colorantes fluorescentes
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Los ensayos basados en la adquisición de imágenes celulares normalmente requieren el uso de sondas fluorescentes que pueden ser tóxicas o funcionar únicamente en células fijadas. Un método sin marcaje para el análisis de...
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La expresión de proteínas fluorescentes, por ejemplo, proteínas fluorescentes verdes (GFP), se utiliza a menudo como lectura para los ensayos con gen indicador. En un ensayo típico con gen indicador, la secuencia reguladora...
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Ensayos de hepatotoxicidad de alto contenido multiplexados usando hepatocitos derivados de iPSC
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Vídeos y seminarios web

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