Contador de células
En el contador de células: Células Jurkat
Establecida a finales de los años 70 a partir de la sangre periférica de un joven con leucemia de células T, las células Jurkat son una línea celular de linfocitos T inmortalizada. Se han utilizado para estudiar la leucemia de células T, la señalización de células T y la sensibilidad de las células cancerosas a tratamientos farmacológicos. Estas pequeñas células redondas crecen fácilmente en suspensión y se han utilizado también como sistema modelo para diferentes ensayos de viabilidad celular y apoptosis, como se muestra aquí.
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Figura 1: Recuentos celulares StainFree
Se adquirieron imágenes de las células Jurkat con el citómetro con adquisición de imágenes SpectraMax MiniMax 300 y las células se identificaron utilizando la configuración “CellsC” (Células C) predefinida. A la izquierda se muestran las imágenes originales con luz transmitida y a la derecha, las mismas imágenes con máscaras púrpura que indican las células identificadas por el software. Se muestran dos densidades de células: 50 000 y 1562 células sembradas por pocillo en una placa de 96 pocillos.
Figura 2: Recuentos celulares con StainFree frente a recuentos celulares con fluorescencia
Las células Jurkat sembradas a densidades que oscilaban de 390 a 50 000 células por pocillo se contaron usando la tecnología StainFree (puntos azules) o se tiñeron con el colorante de ensayo EarlyTox™ Live Cell y se contaron las células fluorescentes verdes (puntos verdes). Los recuentos celulares obtenidos con ambos métodos coincidían bastante en el rango completo de densidades celulares. Se determinaron los recuentos celulares de cuatro sitios por pocillo de los que se tomaron imágenes.
Figura 3: Ensayo EarlyTox™ Live/Dead
Las células Jurkat se trataron con diluciones en serie de estaurosporina (línea roja), camptotecina (línea verde) y etopósido (línea azul) durante 24 horas y, posteriormente, se analizaron con el kit de ensayo EarlyTox Live/Dead de Molecular Devices. Las células vivas se tiñeron con calceína AM (colorante verde) y las células muertas con homodímero de etidio (colorante rojo) y se leyeron en un lector de microplacas multimodo SpectraMax i3x utilizando la función “WellScan” (Barrido de pocillo), que realiza varias lecturas del pocillo espaciadas regularmente. Los resultados se representaron como la relación verde/rojo frente a la concentración de compuesto. Todos los compuestos utilizados en este experimento causaron una considerable reducción de la viabilidad celular en el plazo de 24 horas.
Figura 4: Ensayo EarlyTox Caspase-3/7 NucView™ 488
Las células Jurkat se trataron con estaurosporina (línea roja), camptotecina (línea verde) y etopósido (línea azul) durante 28 horas y, posteriormente, se analizó la apoptosis con el kit de ensayo EarlyTox Caspase-3/7 NucView 488. Las células que expresaban caspasa-3/7 se tiñeron con fluorescencia verde, se adquirieron imágenes y se hizo el recuento con el citómetro con adquisición de imágenes SpectraMax MiniMax 300.
Consejo:
Gracias a su morfología redondeada y a su tamaño uniforme, es muy fácil adquirir imágenes y contar las células Jurkat. Para el recuento de células StainFree, la configuración “CellsC” (Células C) predefinida del software SoftMax Pro funciona muy bien.
Kit de herramientas de análisis de células Jurkat
- Plataforma de detección de microplacas multimodo SpectraMax® i3x
- Citómetro con adquisición de imágenes SpectraMax® MiniMax™ 300
- Software SoftMax® Pro
Tipo de análisis: “Discrete Object Analysis” (Análisis de objetos definidos)
Longitud de onda para la búsqueda de objetos: LT
Acerca de la tecnología de detección de células StainFree
Los ensayos basados en la adquisición de imágenes celulares normalmente requieren el uso de sondas fluorescentes que pueden ser tóxicas o funcionar únicamente en células fijadas. Un método sin marcaje para analizar recuentos celulares y la confluencia celular permite a los investigadores monitorizar cuantitativamente la proliferación celular y la salud de las células sin necesidad de flujos de trabajo laborioso que pueden alterar la viabilidad celular.
La plataforma de microplacas multimodo SpectraMax i3 con el citómetro con adquisición de imágenes MiniMax 300 utiliza la exclusiva tecnología de detección de células StainFree pendiente de patente que le permite realizar ensayos de proliferación celular, citotoxicidad y otros ensayos sin tinciones nucleares como DAPI, que se intercala en el ADN, o colorantes de células vivas que son realmente tóxicos para las células a largo plazo.