Contador de células
En el contador de células: Células MCF-7
Dado que octubre es el mes de la concienciación sobre el cáncer de mama, decidimos destacar la línea celular de cáncer de mama MCF-7. Obtenida en 1970 de una monja llamada Hermana Catherine Frances (Helen Marion) Mallon, esta línea celular recibió su nombre de la Michigan Cancer Foundation, donde se generó. MCF-7 es una de las pocas líneas celulares de cáncer de mama que expresa niveles considerables de receptor de estrógenos (RE) alfa, lo que ofrece a los investigadores un valioso sistema modelo para el estudio del cáncer de mama positivo para RE. Si introduce “MCF-7 cells” en PubMed obtendrá más de 20 000 referencias a esta extraordinaria línea celular.
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Figura 1: Imágenes obtenidas con el citómetro SpectraMax MiniMax
Las células MCF-7 se tiñeron con el colorante EarlyTox™ Live Red y posteriormente se obtuvieron las imágenes con el citómetro SpectraMax MiniMax. Las células se identificaron con una configuración personalizada definida por el usuario. A, imagen con luz transmitida; B, núcleos teñidos con el colorante EarlyTox Live Red; C, células identificadas usando el análisis StainFree (las máscaras púrpura muestran las células identificadas por el software).
Figura 2: Recuentos celulares con StainFree frente a recuentos celulares con fluorescencia
Las células MCF-7 se sembraron a densidades que oscilaban de 156 a 20 000 células por pocillo y los núcleos se tiñeron con colorante EarlyTox Live Red. Las imágenes se adquirieron en 4 sitios por pocillo y se seleccionó una región de interés en el centro de los pocillos para su análisis. A continuación se hizo un recuento utilizando el método StainFree (línea azul) o haciendo un recuento de núcleos fluorescentes rojos (línea roja).
Figura 3: Ensayo EarlyTox Live/Dead
Las células MCF-7 se trataron con diluciones en serie de estaurosporina durante 24 horas y, posteriormente, se analizaron con el kit de ensayo EarlyTox Live/Dead de Molecular Devices. Las células vivas se tiñeron con calceína AM (colorante verde) y las muertas con homodímero de etidio (colorante rojo). Las placas se leyeron en el lector de microplacas multimodo SpectraMax i3x. Los resultados se representaron como la relación verde/rojo frente a la concentración de compuesto; se calculó un valor de IC50 de 21,2 nM usando el software SoftMax Pro.
Consejo:
Las células MCF-7 tienen una morfología poligonal con dimensiones irregulares y tienden a formar grandes agregados. Para el recuento de células StainFree, utilice “Create New Setting” (Crear nueva configuración) y dibuje ligeramente dentro de los bordes de la célula con la herramienta de dibujo amarilla. Utilice la herramienta de dibujo azul para marcar las áreas fuera de los límites de las células. Alternativamente, puede usar la configuración predefinida “CellsC” (Células C), pero podría no ser muy exacta.
Kit de herramientas de análisis de células MCF-7
- Plataforma de detección de microplacas multimodo SpectraMax® i3x
- Citómetro con adquisición de imágenes SpectraMax® MiniMax™ 300
- Software SoftMax® Pro
Luz transmitida (LT)
713 nm (fluorescencia roja)
Exposición a LT: 7 ms
Ajuste del foco de LT: -10 µm
Exposición 713: 6 ms
Ajuste del foco de 713: 0 µm
Tipo de análisis: “Discrete Object Analysis” (Análisis de objetos definidos)
Longitud de onda para la búsqueda de objetos: LT (StainFree) o 713 (núcleos rojos)
Acerca de la tecnología de detección de células StainFree
Los ensayos basados en la adquisición de imágenes celulares normalmente requieren el uso de sondas fluorescentes que pueden ser tóxicas o funcionar únicamente en células fijadas. Un método sin marcaje para analizar recuentos celulares y la confluencia celular permite a los investigadores monitorizar cuantitativamente la proliferación celular y la salud de las células sin necesidad de flujos de trabajo laborioso que pueden alterar la viabilidad celular.
La plataforma de microplacas multimodo SpectraMax i3 con el citómetro con adquisición de imágenes MiniMax 300 utiliza la exclusiva tecnología de detección de células StainFree pendiente de patente que le permite realizar ensayos de proliferación celular, citotoxicidad y otros ensayos sin tinciones nucleares como DAPI, que se intercala en el ADN, o colorantes de células vivas que son realmente tóxicos para las células a largo plazo.