Descubrimiento y optimización de antígenos/inmunógenos

Paso 1: Cribado de la unión al anticuerpo específico del virus

El despliegue de fagos es un potente método in vitro que se puede usar para realizar el cribado de millones de anticuerpos contra antígenos virales, que posteriormente se consideran posibles candidatos a vacunas.
 

Paso 2: Caracterización del inmunógeno

Los estudios de inmunogenicidad se realizan para determinar si los antígenos identificados en el paso anterior son capaces de iniciar una respuesta inmunitaria, ya que el despliegue de fagos solo permite realizar cribados en función de la unión antígeno-anticuerpo. Si el antígeno desencadena una respuesta inmunitaria (a menudo determinada mediante ELISA), este, considerado ahora un inmunógeno, pasará a fases posteriores. La caracterización adicional del inmunógeno se utiliza para crear mediante ingeniería las propiedades deseadas en el inmunógeno en la siguiente fase.
 

Paso 3: Ingeniería de proteínas (inmunógeno)

Es sabido que algunas propiedades de los inmunógenos causan efectos adversos cuando se estos inyectan en animales o humanos. Por tanto, se utilizan herramientas de ingeniería genética como CRISPR/Cas9 para manipular el ADN que codifica el inmunógeno, de modo que ya no posean esas propiedades.
 

Paso 4: Transfección y clonación de células

Una vez optimizado el ADN, es necesario aumentar la escala de producción del inmunógeno para su posterior análisis. En esta fase, es crítico generar una línea celular derivada de un único clon y con una elevada expresión de proteína. En este proceso a menudo se emplean las técnicas de ingeniería genética descritas anteriormente, junto con la clonación de una única célula en placas de micropocillos, especialmente si se utilizan líneas de células de mamífero.
 

Paso 5: Realizar el cribado de atributos de calidad, incluido el título

Tras la clonación de una única célula, se monitoriza el crecimiento de las líneas celulares y se evalúa la expresión de proteínas. A continuación se purifica el inmunógeno y se prepara para su inyección en un animal para inducir una respuesta inmunitaria. Se realiza posteriormente un cribado de los anticuerpos generados por el animal en un ensayo de neutralización de virus para determinar la eficacia de la vacuna.