Investigación sobre la vacuna para el coronavirus SARS-CoV-2 (COVID-19)

Recuento celular/viabilidad celular

Los recuentos celulares y la viabilidad celular son evaluaciones fundamentales en numerosos experimentos biológicos, incluidas muchas aplicaciones virológicas, como la infectividad y el título de virus. La microscopía celular se usa frecuentemente para capturar imágenes de células en campo claro y de fluorescencia para hacer un recuento de ellas y evaluar si son células vivas o muertas, respectivamente.

Estas son algunas notas de aplicación sobre recuento de células y viabilidad celular que pueden ayudarlo en la investigación de vacunas para la COVID-19.

• Tinción de células vivas/muertas (kit de ensayo EarlyTox™ Live/Dead) - Medición de la viabilidad celular y la citotoxicidad con el kit EarlyTox Cell Integrity
• Ensayo MTT - Evalúe la proliferación y la viabilidad celular con lecturas colorimétricas
• Eficiencia de la transfección - Optimización de la transfección de GFP con la plataforma de detección multimodo SpectraMax i3
• Proliferación celular (crecimiento celular) - Confluencia y generación de curvas de crecimiento en el generador de imágenes CloneSelect
• Viabilidad celular (ensayo de viabilidad celular luminiscente CellTiter-Glo®) - Ensayos luminiscentes de viabilidad celular y citotoxicidad en el lector de microplacas multimodo SpectraMax i3x

Desarrollo de líneas celulares

El desarrollo de líneas celulares requiere el descubrimiento de clones derivados de una única célula que produzcan niveles altos y constantes de la proteína terapéutica de interés con los atributos de calidad deseados y que sea posible aumentar de escala para la producción comercial según la BPF.

Estas son algunas notas de aplicaciones sobre desarrollo de líneas celulares que pueden ayudarlo en la investigación de vacunas para la COVID-19.

• Selección de colonias - Desarrollo mejorado de hibridomas específicos de virus con las tecnologías de los generadores de imágenes ClonePix y CloneSelect
• Verificación de la monoclonalidad - Garantía de clonalidad segura usando calceína AM con efecto mínimo sobre la viabilidad
• Clasificación de células - Un flujo de trabajo que combina el aislamiento de células individuales y la adquisición de imágenes de la microplaca mejora la eficiencia de la clonación con una mayor garantía de clonalidad
• Knock-ins/outs de líneas celulares - Valide células editadas con CRISPR utilizando la adquisición de imágenes y detección de inmunotransferencia en un lector de microplacas.

Soluciones para la investigación de la COVID-19

Molecular Devices está comprometida en respaldar a los científicos que están investigando las respuestas celulares en la COVID-19 y el desarrollo de vacunas ofreciendo tecnología y soluciones que pueden ponerse en práctica rápidamente. Disponemos de soluciones de laboratorio validadas y conforme a la normativa que incluyen lectores de microplacas, lavadores, productos biofarmacéuticos y sistemas de adquisición de imágenes celulares para cubrir todas sus necesidades en investigación.

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Ensayos con luciferasa

Las luciferasas son enzimas que utilizan un sustrato llamado luciferina, junto con oxígeno y ATP, en un proceso energético que produce luz, como el resplandor amarillo de las luciérnagas. Los científicos han aprovechado el poder de la luciferasa para concebir reacciones cuya producción de luz se utiliza para monitorizar procesos biológicos como expresión génica, unión biomolecular y viabilidad celular.

Estas son algunas notas de aplicación sobre ensayos con luciferasa que pueden ayudarlo en la investigación de vacunas para la COVID-19:

• Medición de la expresión de luciferasa mediante el kit del ensayo con gen indicador SpectraMax Glo Steady-Luc
• Ensayo Dual-Luciferase Reporter (DLR)
• Monitorización de la activación de NF-κB con un ensayo con gen indicador doble sensible
• Detección de la expresión de luciferasa doble
• Detección muy sensible de luciferasa doble con el kit de ensayo SpectraMax DuoLuc Reporter

Afinidad de unión de proteína y antígeno

La afinidad de unión es una medida de la fuerza con la que dos moléculas (a menudo una pareja antígeno/anticuerpo) interaccionan entre sí. Se han desarrollado muchos tipos de ensayos diferentes para evaluar la afinidad de unión debido a la importante heterogeneidad entre las proteínas, como su tamaño, ubicación, solubilidad y muchas otras características.

Más información sobre las aplicaciones frecuentes para ensayos de afinidad de unión proteína/antígeno para ayudarlo en la investigación de vacunas para la COVID-19:

• ELISA (IgG/IgM) - Ensayo de inmunoadsorción ligado a enzima (ELISA)
• Ensayos de unión con células - Aumente la sensibilidad en ensayos sin lavado mediante la adquisición de imágenes confocales
• HTRF- Servicios de perfiles HTRF en el lector de microplacas multimodo SpectraMax iD5
• AlphaScreen/AlphaLISA - Cribado AlphaLISA en la plataforma de detección Paradigm de microplacas multimodo SpectraMax

Cuantificación de proteínas y ácidos nucleicos (inespecífica)

Los protocolos experimentales implican una gran cantidad de ensayos y preparación de muestras; sin embargo, también prolongan los plazos para garantizar la calidad. Equilibrar la necesidad de velocidad con la necesidad de garantía de calidad se puede lograr con métodos de cuantificación inespecífica. Se pueden medir las cantidades totales de proteínas y ácidos nucleicos mediante absorbancia UV en un lector de microplacas.

Estas son algunas notas de aplicaciones sobre cuantificación (inespecífica) de proteínas y ácidos nucleicos que pueden ayudarlo en la investigación de vacunas para la COVID-19:

• Ensayos colorimétricos con proteínas (ensayos BCA/Bradford) - Medición de proteínas totales en lisados celulares con el lector de microplacas SpectraMax ABS Plus
• Cuantificación de proteínas (mediante absorbancia UV) - Cuantificación directa de proteínas con la microplaca SpectraDrop Micro-Volume
• Cuantificación de ADN/ARN (mediante absorbancia UV) - Mediciones de absorbancia de ADN y ARN con los lectores de microplacas SpectraMax
• Cuantificación de ADN mediante fluorescencia - Cuantificación de muestras de ADNbc usando los kits de ensayo SpectraMax Quant dsDNA

Cuantificación de proteínas y ácidos nucleicos (específica)

Muchos experimentos biológicos tienen por objeto alterar la expresión de proteínas en una célula, ya sea a través de ingeniería genética o del tratamiento farmacológico. Para entender el efecto de esta manipulación, es crítico medir la respuesta de proteínas específicas. Los anticuerpos se utilizan habitualmente en bioensayos (inmunoensayos) con este fin debido a su capacidad inherente para unirse específicamente a una proteína de interés.

Más información sobre las aplicaciones frecuentes para la cuantificación (específica) de proteínas y ácidos nucleicos que pueden ayudarlo en la investigación de vacunas para la COVID-19:

• ELISA (secreción de citoquinas) - Ensayo de inmunoadsorción ligado a enzima (ELISA)
• Inmunotransferencia - Inmunotransferencia
• HTRF (secreción de citoquinas) - Normalización de los ensayos HTRF de citoquinas para viabilidad celular
• AlphaScreen/AlphaLISA - Cribado AlphaLISA en la plataforma de detección Paradigm de microplacas multimodo SpectraMax
• ValitaTITER (cuantificación de IgG mediante polarización de fluorescencia) - Simplifique el flujo de trabajo para medir la IgG en el desarrollo de líneas celulares

Flujos de trabajo para el desarrollo de vacunas

Los flujos de trabajo de desarrollo de vacunas varían dependiendo de la plataforma elegida (p. ej., virus inactivado frente a vacuna de ADN); cada una tiene sus propias ventajas. Aquí hemos abordado una serie de flujos de trabajo relacionados con virus, desde el descubrimiento de anticuerpos y antígenos al desarrollo de líneas celulares.

Más información sobre las aplicaciones frecuentes para flujos de trabajo para el desarrollo de vacunas que pueden ayudarlo en la investigación de vacunas para la COVID-19:

• Flujo de trabajo para el descubrimiento de antígenos/inmunógenos
• Flujo de trabajo para el descubrimiento de anticuerpos - despliegue de fagos
• Flujo de trabajo para el descubrimiento de anticuerpos - cribado de hibridomas
• Flujo de trabajo de líneas celulares estables

Neutralización vírica

La eficacia de vacunas y fármacos antivirales se evalúa según su capacidad para inhibir la entrada (infección) de virus dentro de las células que crecen en cultivo.

• Ensayo de neutralización por reducción de placas (PRNT)
• Ensayo de neutralización de virus por reducción (VRNT) - Prueba de neutralización viral por reducción: Ensayo de alto rendimiento de neutralización de virus con adquisición de imágenes de células individuales para el virus del Dengue
• Microneutralización    Desarrollo de un ensayo de alto rendimiento con fluorescencia de microneutralización de formación de focos del virus respiratorio sincitial

Patogénesis de virus (vías virales)

Entender los mecanismos básicos de la entrada, replicación, diseminación vírica, etc. es crítico para el desarrollo de tratamientos eficaces para enfermedades infecciosas. La microscopía de fluorescencia es una herramienta fundamental en cualquier laboratorio de virología ya que permite la visualización de las vías virales con alta resolución y a lo largo del tiempo. La señalización celular y los ensayos con gen indicador se pueden emplear para explorar las vías celulares a las que afectan los virus y se procesan utilizando lectores de microplacas.

Estas son algunas notas de aplicación sobre patogénesis de virus (vías virales) que pueden ayudarlo en la investigación de vacunas para la COVID-19:

• Internalización - Visualice las vesículas subcelulares para cuantificar la autofagia en las células neuronales
• Ensayos con gen indicador - Medición de la expresión de luciferasa mediante el kit del ensayo con gen indicador SpectraMax Glo Steady-Luc
• Señalización celular (GPCR) - Flujo de trabajo completo para cAMP utilizando el kit de ensayo fluorescente CatchPoint cAMP

Título de virus

Los virus infectan las células para replicarse, una tarea que no pueden realizar por sí solos. La determinación de la cantidad de virus en una muestra sin células no proporciona información sobre su infectividad, lo que limita su utilidad. Por el contrario, la adquisición de imágenes celulares se utiliza para detectar la capacidad de un virus determinado para infectar células en cultivo. Las concentraciones de virus se determinan a partir de la fracción de células infectadas.

• Ensayo de placas - En la Universidad de Zúrich utilizan el sistema ImageXpress Widefield para investigar las interacciones entre patógeno y huésped
• Ensayo de formación de focos
• Dilución de punto final