El reto
El objetivo de estos estudios es identificar mecanismos que sean susceptibles de tratamiento y, por tanto, aplicables a la prevención de la pérdida de memoria. El Dr. Krishnan investiga la expresión diferencial de la fosfolipasa D (PLD) y los efectos de sus isoformas usando un enfoque multidisciplinar que consiste en estudios de electrofisiología, señalización y conductuales.
La solución
Sus estudios de electrofisiología incluyen el uso de dos equipos de patch-clamp, cada uno con un amplificador de microelectrodo MultiClamp 700B y un digitalizador Digidata. Un equipo se utiliza para los registros de parche y campo en cortes de cerebro de roedor, mientras que el otro equipo está diseñado para registros de parche de membrana celular. Ambos equipos de patch-clamp tienen la ventaja de realizar registros dobles para evaluar los mecanismos de señalización subyacentes a la memoria y el recuerdo. Dichos estudios serán fundamentales en la generación del mapa de circuitos cerebrales afectados, a la vez que se registran simultáneamente los cambios a nivel de neuronas individuales.
- La enfermedad de Alzheimer es la demencia neurodegenerativa asociada a la edad más común y más grave
- Actualmente no existe cura por lo que es de urgente necesidad identificar nuevas dianas para la prevención y el tratamiento
Productos utilizados
Equipado con hasta cuatro canales HumSilencer™, el sistema de adquisición de datos de bajo ruido Axon™ Digidata® 1550B le permite registrar múltiples células de una vez para estudios de redes celulares sin ruido en la línea de frecuencia de 50/60 Hz.
El amplificador de microelectrodo MultiClamp™ 700B es un amplificador de microelectrodo versátil, controlado por ordenador, diseñado para el registro de la fijación de voltaje en parche (retroalimentación resistiva, cuatro rangos) o la fijación de corriente de alta velocidad (seguidor de voltaje, tres rangos) dentro del mismo cabezal (headstage). Muchas funciones automáticas y acondicionamiento eficaz de la señal. Ideal para numerosas aplicaciones, como fijación de corriente de alta velocidad (electrodo afilado o potenciales de campo), patch-clamp (célula completa, macroparche o parche escindido), voltametría/amperometría, mediciones selectivas de iones y registros de bicapa.
Los resultados
El Dr. Krishnan utiliza dos amplificadores de electrodos MultiClamp 700B, un sistema Axon Digidata 1550A con HumSilencer, un sistema Axon Digidata 1332A y el software de adquisición y análisis de datos de electrofisiología Axon pCLAMP 10 para:
- Descubrir los ritmos circadianos periféricos del olfato en Drosophila melanogaster, la primera prueba de un cambio funcional en el oscilador periférico que rige los ritmos circadianos.
- Analizar la función sináptica en el núcleo amigdalino que controla la expresión de memoria a largo plazo de las memorias aversiva y apetitiva.
- Evaluar cómo la alteración de la función sináptica en el hipocampo constituye la base de los eventos tempranos en los estados neurodegenerativos que tienen como consecuencia la pérdida patológica de memoria.
Referencias
Ver nuestro seminario web con el Dr. Krishnan: Uso de estudios de electrofisiología para agilizar el estudio mecanicista de recepción y transmisión
Resumen de su investigación en el congreso de Neuroscience 2016