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En la Universidad de Leeds utilizan ImageXpress Pico para investigar la función de proteínas

Universidad de Leeds

Darren Tomlinson

Heather Martin

Sistema de adquisición automática de imágenes celulares ImageXpress Pico

El reto

En el laboratorio del Dr. Tomlinson, en la School of Molecular and Cellular Biology de la Universidad de Leeds, Reino Unido, investigan la función de las proteínas a nivel molecular. El grupo de investigación de Darren Tomlinson está interesado en el uso de una nueva herramienta de reconocimiento molecular, llamada afímero, para estudiar la función de las proteínas. Un afímero (denominado también Adhiron) es una proteína estructural que contiene dos bucles aleatorizados para el reconocimiento molecular. Se pueden utilizar como reactivos alternativos a los anticuerpos para aplicaciones como el diagnóstico y para sondear la superficie de proteínas diana para identificar dominios clave implicados en la función de las proteínas. Su laboratorio proporciona un servicio de cribado frente a mucho tipos de moléculas pero su enfoque es utilizar la estructura del afímero para entender la función de las proteínas a nivel molecular.

Para estudiar estos afímeros, el grupo necesitaba un sistema fácil de usar que pudiera procesar cribados a pequeña escala.

ImageXpress Pico para investigar sobre la función de las proteínas

La solución

El grupo eligió el sistema ImageXpress Pico como alternativa asequible y fácil de usar a otros sistemas de adquisición de imágenes de alto contenido.

Los resultados

El grupo está usando principalmente el sistema ImageXpress Pico para cribados a pequeña escala para estudiar el impacto de afímeros específicos de diversas proteínas intracelulares de las vías de señalización posteriores a las proteínas diana. En la figura 1 se puede ver un ejemplo que muestra fibroblastos embrionarios de ratón transfectados con afímeros marcados con GFP (verde) teñidos para ERK fosforilada (naranja). Demuestra que el afímero específico de la proteína reduce la expresión de pERK estimulada por EGF.

El grupo también utiliza el sistema ImageXpress Pico para experimentos de evolución temporal en los que la función de control de temperatura es especialmente útil.

Ahora están adquiriendo imágenes de aproximadamente 2-3 placas al día, dependiendo del ensayo, ya que suelen usar 3-4 fluoróforos/placa.

“Nos gusta la interfaz fácil de usar del software CRX que facilita su uso a personas no especialistas”.

 

Fibroblastos embrionarios de ratón transfectados con GFP

Figura 1: Fibroblastos embrionarios de ratón transfectados con afímeros marcados con GFP (verde) y teñidos para ERK fosforilada (naranja). Las flechas señalan las células que expresan el afímero en las que se observa una clara reducción en la tinción de pERK. Imágenes adquiridas en ImageXpress Pico con un aumento de 20X.

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