CULTIVO DE ESFEROIDES
Las células 3D se pueden cultivar directamente en una placa de adherencia ultrabaja (ULA) de fondo redondo para desarrollar la forma esférica típica de un esferoide. Las células también pueden crecerse en material de laboratorio alternativo, como una plaza de Petri, un matraz u otra microplaca, antes de la transferencia a una placa para adquisición de imágenes.
Placas de 96 o 384 pocillos
La mayoría de los cultivos celulares 3D para el cribado de alto contenido y alto rendimiento se realizan en microplacas de 96 o 384 pocillos. Las microplacas ULA de fondo en U o redondo facilitan la forma esférica para formar los esferoides o también se pueden cultivar en una microplaca de fondo plano usando hidrogeles para simular las matrices extracelulares (MEC). En los protocolos optimizados de cultivos celulares de esferoides para el sistema de adquisición de imágenes de alto contenido ImageXpress® Micro Confocal se pueden utilizar placas ULA de 96 y 384 pocillos de fondo en U con un procedimiento de tinción de un único paso que reduce el tiempo de ensayo y minimiza la variabilidad.
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TRATAR CON COMPUESTOS
Tras la formación del esferoide, se añaden a los pocillos compuestos y, a continuación, se incuban durante uno o varios días, dependiendo del mecanismo que se esté estudiando. Generalmente, se emplean tiempos más cortos para estudiar la apoptosis y tiempos más largos para estudios multiparamétricos de citotoxicidad. Para tratamientos farmacológicos que requieren una mayor duración, los compuestos se renuevan periódicamente durante la incubación. La concentración de los compuestos y el periodo de incubación dependen del protocolo elegido.
TEÑIR CON MARCADORES
Una vez finalizado el tratamiento con compuestos, se añaden las tinciones directamente a los medios. Se pueden emplear colorantes que no requieren lavado para evitar perturbar los esferoides, aunque estos se pueden lavar cuidadosamente incluso con automatización, si fuera necesario.
Kits de ensayo
Kits de ensayo sólidos y fáciles de usar para investigación en ciencias biológicas, descubrimiento y desarrollo de fármacos y bioensayos. Nuestros kits de ensayo se han optimizado para su uso con nuestros instrumentos. Se pueden realizar cribados de compuestos en fases más tempranas del descubrimiento de fármacos y permitir la caracterización de un perfil completo de concentración-respuesta de compuestos problema para viabilidad celular, proliferación celular, axiogénesis y más.
Sistema de adquisición de imágenes de alto contenido
El sistema ImageXpress Micro Confocal es una solución exclusiva de adquisición de imágenes confocales con capacidad para adquirir imágenes de más de un millón de pocillos a la semana. El software MetaXpress permite la adquisición de Z-stacks 3D. Las imágenes del plano Z se pueden guardar individualmente o combinarse en una única imagen de proyección 2D utilizando un algoritmo matemático.
ADQUISICIÓN DE IMÁGENES CELULARES 3D
Se pueden capturar imágenes individualmente dentro del cuerpo del esferoide o como Z-stack (múltiples imágenes tomadas a diferentes profundidades) utilizando un equipo especializado de adquisición de imágenes.
ANÁLISIS DE LA IMAGEN CELULAR 3D
Se puede utilizar el software de análisis de imágenes celulares para realizar un análisis cuantitativo de las imágenes de las células para evaluar y monitorizar la expresión de las células frente a diferentes marcadores y cuantificar las lecturas biológicas.
Software de adquisición de imágenes de alto contenido
El software de adquisición y análisis de imágenes de alto contenido MetaXpress es una herramienta de análisis multinivel para una amplia variedad de aplicaciones 2D y 3D optimizadas para el sistema ImageXpress Micro Confocal. Los módulos de aplicación de adquisición y análisis integrados para modelos celulares 3D simplifican la cuantificación de alto rendimiento de estructuras 3D con mediciones de volumen, intensidad y distancia.