Kits de ensayo de viabilidad celular EarlyTox

Kit de ensayo EarlyTox™ Live/Dead

Este kit permite la detección de poblaciones de células vivas y muertas de mamífero basada en la integridad de la membrana celular usando un lector de microplacas de fluorescencia. La calceína AM es un marcador de células vivas muy utilizado. La calceína AM no fluorescente atraviesa la membrana celular intacta y se convierte en calceína fluorescente por la acción de las esterasas intracelulares. Por tanto, el número de células vivas viene indicado por la intensidad de la fluorescencia verde en el citoplasma, con excitación a 495 nm y emisión a 530 nm. EthD-III apenas es fluorescente y no puede atravesar una membrana plasmática intacta. En caso de integridad de la membrana celular comprometida, que se asocia con la muerte celular, EthD-III penetra en las células y se une a ácidos nucleicos, lo que da lugar a fluorescencia roja brillante en las células muertas, con excitación a 530 nm y emisión a 645 nm.

Kit de ensayo EarlyTox™ Live Cell

Este kit permite la detección de la población de células de mamífero vivas usando un lector de microplacas de fluorescencia basada en la integridad de la membrana celular y la actividad esterasa intracelular. La calceína AM es un marcador de células vivas muy utilizado. La calceína AM no fluorescente atraviesa la membrana celular intacta y se convierte en calceína, la forma fluorescente, por la acción de las esterasas intracelulares. Por tanto, el número de células vivas viene indicado por la intensidad de la fluorescencia verde en el citoplasma, con excitación a 495 nm y emisión a 530 nm. La baja toxicidad celular de la calceína AM también permite el seguimiento celular a largo plazo y el ensayo de proliferación celular.

Kit de ensayo EarlyTox™ Caspase-3/7 R110

Este kit permite el análisis de la apoptosis basada en la actividad de la caspasa-3/7 y su secuencia diana consenso, Asp-Glu-Val-Asp (DEVD). La caspasa-3 y la caspasa-7 son proteasas que se activan durante la fase de ejecución de la apoptosis. Este kit proporciona un ensayo homogéneo de un solo paso diseñado específicamente para los lectores de microplacas. El sustrato fluorogénico (Ac-DEVD)2-R110 contiene dos secuencias diana consenso DEVD y es hidrolizado completamente en el lisado celular por las enzimas. La hidrólisis de ambos péptidos DEVD libera el colorante fluorescente verde R110, lo que origina un aumento considerable de la fluorescencia, con excitación a 490 nm y emisión a 520 nm. El kit de ensayo incluye el inhibidor competitivo de caspasa-3/7 Ac-DEVD-CHO para su uso como control negativo. El kit también incluye R110 para generar una curva patrón, que se puede utilizar para cuantificar la actividad caspasa-3.

Kit de ensayo EarlyTox™ Caspase-3/7 NucView 488 y kit de ensayo EarlyTox™ Caspase-3/7-D NucView 488

El kit permite la detección de apoptosis en poblaciones de células intactas basada en la medición de la actividad caspasa-3/7 usando un lector de microplacas de fluorescencia o un sistema de adquisición de imágenes de fluorescencia. La caspasa-3 y la caspasa-7 son proteasas que se activan durante la fase de ejecución de la apoptosis. El sustrato NucView 488 Caspase-3 (formulado en DMSO o en solución salina tamponada con fosfato [PBS], para el kit de ensayo EarlyTox Caspase-3/7-D NucView 488 y el kit de ensayo EarlyTox Caspase-3/7 NucView 488 respectivamente) se utiliza para detectar la actividad caspasa-3/7 en células intactas sin interferir con la actividad de las caspasas. El sustrato consiste en un colorante fluorogénico de ADN que se acopla a la secuencia de reconocimiento DEVD de la caspasa-3/7. El sustrato, que inicialmente no es fluorescente, atraviesa la membrana plasmática y entra en el citoplasma. En células apoptóticas, la caspasa-3/7 escinde el sustrato, liberando un colorante de ADN de alta afinidad que migra al núcleo de la célula y tiñe el ADN con fluorescencia verde brillante, con excitación a 500 nm y emisión a 530 nm. La tinción NucView 488 se puede fijar en formaldehído y es compatible con la inmunotinción posterior. El kit de ensayo incluye un reactivo de enmascaramiento opcional para reducir la fluorescencia de fondo cuando sea necesario. Se recomienda la formulación en PBS para las células que sean sensibles al DMSO.

Kit de ensayo EarlyTox™ Glutathione

Este kit permite la detección de un evento de apoptosis temprano basada en la medición del contenido de glutatión en células de mamífero vivas usando el lector de microplacas de fluorescencia. La disminución del glutatión (GSH) celular, que es un importante antioxidante en células de mamífero, se produce en las primeras fases de la apoptosis mediada por mitocondrias debido a la salida del GSH. Este kit utiliza monoclorobimano (MCB), un colorante permeable a la célula que tiene una alta afinidad por GSH, para detectar el nivel de GSH celular en un evento apoptótico. El colorante sin reaccionar es apenas fluorescente. Tras la reacción del colorante con GSH, catalizada por las enzimas glutatión-S-transferasas (GST) endógenas, el colorante tiene fluorescencia azul, con excitación a 394 nm y emisión a 490 nm. La intensidad de la señal de fluorescencia generada a partir del ensayo refleja la cantidad de GSH presente en las células.