EL ANTICUERPO DE CAPTURA SE UNE AL POCILLO
En primer lugar, el anticuerpo de captura se une al fondo del pocillo de la microplaca.
Placa de ELISA
La mayoría de los ELISA se realizan en microplacas de 96 o 384 pocillos, siendo la placa de 96 pocillos la que se usa con más frecuencia, por lo que también se denomina placa de ELISA. El fondo de los pocillos de la microplaca sirve de superficie sólida a la que se unen los anticuerpos y otros reactivos. Normalmente, las microplacas se incluyen en un kit de ELISA.
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ADICIÓN DE LA MUESTRA
La muestra se añade al pocillo y el antígeno que contiene la muestra se une al anticuerpo de captura.
LAVADO DE LA MICROPLACA
El material no unido se elimina mediante lavado, dejando solo el antígeno de interés y minimizando la posibilidad de señal de fondo alta.
Lector y lavador de microplacas de ELISA
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ADICIÓN DE ANTICUERPO DE DETECCIÓN
El anticuerpo de detección conjugado con enzima se une a un segundo sitio en el antígeno de interés, lo que proporciona el medio para detectar el antígeno.
LAVADO DE LA MICROPLACA
Los anticuerpos no unidos se eliminan mediante el lavado, dejando solo los anticuerpos específicos de la diana de interés, lo que minimiza de nuevo la posibilidad de señal de fondo.
Lavador de placas de ELISA
Lavador de microplacas AquaMax: La aspiración y dispensación de las microplacas de 96 y 384 pocillos se produce simultáneamente en todos los pocillos, lo que tiene como resultado ensayos de gran precisión y un procesamiento más rápido de las microplacas sin necesidad de indexación mecánica de las placas ni procesamiento en cuadrantes.
ADICIÓN DEL SUSTRATO
La enzima transforma el sustrato sobre el anticuerpo de detección, lo que produce un cambio de color, siendo la intensidad proporcional a la cantidad de antígeno presente.
Dependiendo de la enzima y el sustrato utilizados, la lectura también puede ser fluorescente o luminiscente.
LECTURA DE LA PLACA
El lector de microplacas detecta el producto de la reacción de color y genera valores de densidad óptica (DO) que indican cuánta luz absorbe el contenido de cada pocillo.
Lector de placas de ELISA
Un lector de placas de ELISA, como el lector de absorbancia de microplacas de ELISA SpectraMax ABS Plus, detecta el cambio de color producido cuando el antígeno diana está presente. Lo hace midiendo qué cantidad de la luz que pasa a través de los pocillos de la microplaca es absorbida por el material que contienen los pocillos. Cuanto más antígeno haya, mayor será el valor de la absorbancia.
Software del lector de placas de ELISA
Se utiliza un software de lector de placas de ELISA, como nuestro software de análisis de datos SoftMax Pro, para representar las curvas patrón y calcular los resultados a partir de los valores de absorbancia proporcionados por el lector de microplacas.
Se procesa una curva patrón para poder calcular la cantidad de antígeno en cada muestra de forma exacta. Un protocolo preconfigurado ayuda a ahorrar tiempo calculando los resultados automáticamente.
CÁLCULO DE LOS RESULTADOS
Se calcula la cantidad de antígeno que contiene cada muestra y se comparan muestras diferentes, por ejemplo, células sometidas a diferentes condiciones de tratamiento.
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Células de trabajo de ELISA listas para la automatización
La automatización de un flujo de trabajo ELISA puede eliminar de sus manos los tediosos pasos de preparación de muestras, pipeteo de reactivos y lavado de microplacas, y puede mejorar la reproducibilidad de sus resultados. Un flujo de trabajo de ELISA automatizado puede emparejarse con componentes y software de control, creando células de trabajo de alto rendimiento ampliables.