Señalización del segundo mensajero de GPCR acoplados a Gi y Gs en células vivas
La detección de la actividad del segundo mensajero de GPCR acoplado a Gi y Gs se ha realizado tradicionalmente usando ensayos como el de cAMP de punto final o de unión con radioactividad que requieren la lisis celular. Dichos ensayos miden la actividad en un único punto temporal de la respuesta celular y no proporcionan información cinética. Otra opción es utilizar el acoplamiento forzado de los GPCR acoplados a Gi y Gs a Gα16, seguido de la detección mediante fluorescencia del flujo de calcio tras la activación del receptor agonista. De nuevo, este ensayo no es del todo óptimo porque no hay señalización a través de la vía del cAMP biológicamente relevante.
Aquí demostramos la actividad del receptor endógeno en las líneas celulares CHO-K1 y HEK-293 que expresan el plásmido GloSensor™ usando el sistema FLIPR.
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