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Kits de ensayo FLIPR Membrane Potential
Los kits de ensayo FLIPR® Membrane Potential proporcionan formulaciones homogéneas con fluorescencia para la observación de los cambios en el potencial de membrana en tiempo real asociados a la activación de canales iónicos y proteínas transportadoras de iones.
Descripción general de los kits de ensayo FLIPR Membrane Potential
Cada kit de ensayo homogéneo utiliza una combinación de colorante indicador y tecnología de extinción de señal patentada para maximizar la aplicabilidad en líneas celulares/canales/compuestos, eliminando a la vez las causas de la variabilidad. Esta exclusiva fórmula responde 10 veces más rápido y presenta mayor estabilidad a la temperatura que los colorantes tradicionales, lo que proporciona datos de cribado de alta calidad que muestran buena relación con los ensayos manuales de patch-clamp.
Puesto que la actividad de los canales iónicos es muy sensible y se ve afectada potencialmente por sutiles cambios químicos, hay disponibles dos kits de ensayo FLIPR® Membrane Potential (rojo y azul) para seleccionar las condiciones óptimas para sus delicadas dianas de canales iónicos. Ambas formulaciones utilizan la tecnología de extinción de señal patentada de Molecular Devices para potenciar las ventanas de señal y generar puntuaciones Z aceptables para el cribado de diferentes dianas, como canales TRP, activados por ligando, por nucleótidos cíclicos o por voltaje.
A diferencia de los colorantes tradicionales como DiBAC, el kit de ensayo FLIPR Membrane Potential detecta cambios de gradiente bidireccionales, por lo que usted puede monitorizar tanto las condiciones variables como de control en un único experimento. Recomendamos evaluar ambos kits de ensayo para que descubra qué formulación es la correcta para su diana.
Datos de los kits de ensayo FLIPR Membrane Potential
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Comparación de los datos de patch-clamp y del kit de ensayo FLIPR Membrane Potential
El método de patch-clamp manual puede detectar respuestas rápidas lo que permite la detección de cambios muy rápidos en el potencial de membrana. Comparando los datos generados usando los kits de ensayo FLIPR Membrane Potential con los resultados del método de patch-clamp manual se observa una buena correlación (figuras 1 y 2). Se puede observar tanto la apertura como el cierre del canal iónico. Esto difiere de DiBAC, que solo puede mostrar cambios unidireccionales en el potencial de membrana (figura 3).
Comparación entre los ensayos de patch-clamp (mV) y FLIPR Membrane Potential (fluorescencia) en células CHO que expresan un canal de K+ activado por voltaje. Datos cortesía de Michael Xie, Millenium Pharmaceuticals.
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Cambio de fluorescencia frente a potencial de membrana
Correlación de cambios en ensayos de potencial de membrana frente a fluorescencia en el instrumento FLIPR: las células CHO transfectadas con canales de K+ se expusieron a diferentes concentraciones de potasio. Datos cortesía de Michael Xie, Millenium Pharmaceuticals.
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Comparación de canales de calcio activados por ligando
Comparación entre los ensayos del kit de ensayo FLIPR Membrane Potential, DiBAC y Fluo-3 en canales de Ca2+ activados por voltaje. Datos cortesía de Michael Xie, Millenium Pharmaceuticals.
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Dos opciones de formulaciones de extinción de señal del kit Membrane Potential
Puesto que la actividad de los canales iónicos es sensible a las interferencias, y la interferencia química con un canal iónico en particular es en gran medida impredecible, los kits de ensayo FLIPR Membrane Potential tiene dos formulaciones. Ambas formulaciones combinan las ventajas de nuestro exclusivo colorante indicador de potencial de membrana con nuestra tecnología de extinción de señal patentada. Una formulación utiliza un extintor de señal azul y la otra formulación utiliza un extintor de señal rojo. Recomendamos que se evalúen ambas versiones con cada diana/línea celular en concreto para determinar qué formulación proporcionará el rendimiento óptimo.
Modulación de un canal Nav1.5 en células CHL-hH1 por tetrodotoxina. En este ensayo se usó veratridina 30 nM para mantener el canal de sodio en estado abierto. La modulación se produce a medida que la concentración de tetradotoxina aumenta. Se produce un rápido flujo de entrada de Na+ en la célula, despolarizándose posteriormente la membrana, que tiene como consecuencia un aumento de la fluorescencia. En este ensayo, el kit Membrane Potential Red muestra la ventana de señal más grande y el factor Z más grande.
Tecnología de los kits de ensayo FLIPR Membrane Potential
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Cambios en la intensidad de fluorescencia con el aumento o la disminución del potencial de membrana celular
Los kits de ensayo FLIPR Membrane Potential detectan la modulación de los canales iónicos mediante el aumento o la disminución de la señal fluorescente cuando el potencial de membrana celular cambia. La señal fluorescente aumenta en intensidad durante la despolarización de la membrana a medida que el colorante sigue a los iones con carga positiva dentro de la célula. Durante la hiperpolarización de la membrana, la señal fluorescente disminuye en intensidad a media que el colorante sigue a los iones con carga positiva fuera de la célula. Los kits son excepcionalmente adecuados para su uso con la función de pipeteo y lectura simultáneos del sistema FLIPR® Tetra y los lectores de microplacas FlexStation® 3 para capturar la cinética rápida asociada a la activación de canales iónicos.
Los kits emplean un colorante de extinción de señal para reducir la fluorescencia de fondo y mejorar la relación señal-ruido. Molecular Devices ofrece en exclusiva la tecnología de extinción de señal patentada (número de patente U.S. 6 420 183 número de patente EPO 0 906 572) para los investigadores en ciencias de la vida y descubrimiento de fármacos, mediante la adquisición de los kits de ensayo FLIPR.
Opciones de pedido de los kits de ensayo FLIPR Membrane Potential
Kit de ensayo FLIPR Membrane Potential
Evaluation Kit - N.º ref.: R8128
- (5) viales de Componente A* para Blue
- (5) viales de Componente A* para Red
- (1) frasco de tampón de ensayo 1X (Componente B)
* Cada vial de reactivo (Componente A) es suficiente para 1 placa (96, 384 o 1536 pocillos). Cada kit es suficiente para 10 placas.
N.º R8128
Kit Explorer ROJO - Ref.: R8126
- (10) viales de Componente A*
- (1) frasco de tampón de ensayo 1X (Componente B)
* Cada vial de reactivo (Componente A) es suficiente para 1 placa (96, 384 o 1536 pocillos). Cada kit es suficiente para 10 placas.
N.º R8126
Kit Bulk ROJO - Ref.: R8123
- (10) viales de Componente A*
- (1) frasco de tampón de ensayo 10X (Componente B)
* Cada vial de reactivo (Componente A) es suficiente para 10 placas (96, 384 o 1536 pocillos). Cada kit es suficiente para 100 placas.
N.º R8123
Kit Explorer AZUL - Ref.: R8042
- (10) viales de Componente A*
- (1) frasco de tampón de ensayo 1X (Componente B)
* Cada vial de reactivo (Componente A) es suficiente para 1 placa (96, 384 o 1536 pocillos). Cada kit es suficiente para 10 placas.
N.º R8042
Kit Bulk AZUL - Ref.: R8034
- (10) viales de Componente A*
- (1) frasco de tampón de ensayo 10X (Componente B)
* Cada vial de reactivo (Componente A) es suficiente para 10 placas (96, 384 o 1536 pocillos). Cada kit es suficiente para 100 placas.
N.º R8034
Recursos de los kits de ensayo FLIPR Membrane Potential
eBook
Ensayos optimizados para una investigación pionera
Optimized Assays for Breakthrough Research
La investigación en biología se ha simplificado considerablemente gracias a la disponibilidad de kits de ensayo, instrumentos y protocolos de ensayo estandarizados de fabricantes comerciales.
Póster científico
Desarrollo del ensayo del kit FLIPR TETRA™ Membrane Potential en formato de 384 y 1536 pocillos
FLIPR TETRA™ Membrane Potential Kit Assay Development in 384-Well and 1536 -Well Format
Consulte este póster para obtener información sobre el kit de ensayo FLIPR TETRA Membrane Potential y una comparación entre el formato de 384 y el de 1536 pocillos.
Hoja de datos
Kits de ensayo FLIPR Membrane Potential
FLIPR Membrane Potential Assay Kits
Consulte esta hoja de datos para obtener información sobre los kits de ensayo FLIPR Membrane Potential que proporcionan un alto rendimiento, mostrando a la vez una buena correlación con los datos del ensayo de patch-clamp manual.
Nota de aplicación
Medición del potencial de membrana utilizando el kit de ensayo FLIPR® Membrane Potential en los sistemas de lectores de placas con adquisición de imágenes fluorimétricas (FLIPR)
Measuring Membrane Potential using the FLIPR® Membrane Potential Assay Kit on Fluorometric Imaging Plate Reader (FLIPR) Systems
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Desarrollo de un ensayo del canal Cav 1,3 utilizando métodos optogénicos en el sistema FLIPR Tetra
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Optimización del ensayo del canal NaV1.5 con los kits de ensayo FLIPR Membrane Potential
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Productos y servicios compatibles de los kits de ensayo FLIPR Membrane Potential
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