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Descripción general de los kits de ensayo FLIPR Membrane Potential

Cada kit de ensayo homogéneo utiliza una combinación de colorante indicador y tecnología de extinción de señal patentada para maximizar la aplicabilidad en líneas celulares/canales/compuestos, eliminando a la vez las causas de la variabilidad. Esta exclusiva fórmula responde 10 veces más rápido y presenta mayor estabilidad a la temperatura que los colorantes tradicionales, lo que proporciona datos de cribado de alta calidad que muestran buena relación con los ensayos manuales de patch-clamp.

Puesto que la actividad de los canales iónicos es muy sensible y se ve afectada potencialmente por sutiles cambios químicos, hay disponibles dos kits de ensayo FLIPR® Membrane Potential (rojo y azul) para seleccionar las condiciones óptimas para sus delicadas dianas de canales iónicos. Ambas formulaciones utilizan la tecnología de extinción de señal patentada de Molecular Devices para potenciar las ventanas de señal y generar puntuaciones Z aceptables para el cribado de diferentes dianas, como canales TRP, activados por ligando, por nucleótidos cíclicos o por voltaje.

A diferencia de los colorantes tradicionales como DiBAC, el kit de ensayo FLIPR Membrane Potential detecta cambios de gradiente bidireccionales, por lo que usted puede monitorizar tanto las condiciones variables como de control en un único experimento. Recomendamos evaluar ambos kits de ensayo para que descubra qué formulación es la correcta para su diana.

Datos de los kits de ensayo FLIPR Membrane Potential

  • Patch-clamp frente a los ensayos FLIPR Membrane Potential

    Comparación de los datos de patch-clamp y del kit de ensayo FLIPR Membrane Potential

    El método de patch-clamp manual puede detectar respuestas rápidas lo que permite la detección de cambios muy rápidos en el potencial de membrana. Comparando los datos generados usando los kits de ensayo FLIPR Membrane Potential con los resultados del método de patch-clamp manual se observa una buena correlación (figuras 1 y 2). Se puede observar tanto la apertura como el cierre del canal iónico. Esto difiere de DiBAC, que solo puede mostrar cambios unidireccionales en el potencial de membrana (figura 3).

    Comparación entre los ensayos de patch-clamp (mV) y FLIPR Membrane Potential (fluorescencia) en células CHO que expresan un canal de K+ activado por voltaje. Datos cortesía de Michael Xie, Millenium Pharmaceuticals.

  • Cambio de fluorescencia frente a potencial de membrana

    Correlación de cambios en ensayos de potencial de membrana frente a fluorescencia en el instrumento FLIPR: las células CHO transfectadas con canales de K+ se expusieron a diferentes concentraciones de potasio. Datos cortesía de Michael Xie, Millenium Pharmaceuticals.

    Cambio de fluorescencia frente a potencial de membrana

  • Comparación de canales de calcio activados por ligando

    Comparación de canales de calcio activados por ligando

    Comparación entre los ensayos del kit de ensayo FLIPR Membrane Potential, DiBAC y Fluo-3 en canales de Ca2+ activados por voltaje. Datos cortesía de Michael Xie, Millenium Pharmaceuticals.

  • Dos opciones de formulaciones de extinción de señal del kit Membrane Potential

    Puesto que la actividad de los canales iónicos es sensible a las interferencias, y la interferencia química con un canal iónico en particular es en gran medida impredecible, los kits de ensayo FLIPR Membrane Potential tiene dos formulaciones. Ambas formulaciones combinan las ventajas de nuestro exclusivo colorante indicador de potencial de membrana con nuestra tecnología de extinción de señal patentada. Una formulación utiliza un extintor de señal azul y la otra formulación utiliza un extintor de señal rojo. Recomendamos que se evalúen ambas versiones con cada diana/línea celular en concreto para determinar qué formulación proporcionará el rendimiento óptimo.

    Modulación de un canal Nav1.5 en células CHL-hH1 por tetrodotoxina. En este ensayo se usó veratridina 30 nM para mantener el canal de sodio en estado abierto. La modulación se produce a medida que la concentración de tetradotoxina aumenta. Se produce un rápido flujo de entrada de Na+ en la célula, despolarizándose posteriormente la membrana, que tiene como consecuencia un aumento de la fluorescencia. En este ensayo, el kit Membrane Potential Red muestra la ventana de señal más grande y el factor Z más grande.

    Modulación de un canal Nav1.5

Tecnología de los kits de ensayo FLIPR Membrane Potential

  • Cambios en la intensidad de fluorescencia con el aumento o la disminución del potencial de membrana celular

    Cambios en la intensidad de fluorescencia con el aumento o la disminución del potencial de membrana celular

    Los kits de ensayo FLIPR Membrane Potential detectan la modulación de los canales iónicos mediante el aumento o la disminución de la señal fluorescente cuando el potencial de membrana celular cambia. La señal fluorescente aumenta en intensidad durante la despolarización de la membrana a medida que el colorante sigue a los iones con carga positiva dentro de la célula. Durante la hiperpolarización de la membrana, la señal fluorescente disminuye en intensidad a media que el colorante sigue a los iones con carga positiva fuera de la célula. Los kits son excepcionalmente adecuados para su uso con la función de pipeteo y lectura simultáneos del sistema FLIPR® Tetra y los lectores de microplacas FlexStation® 3 para capturar la cinética rápida asociada a la activación de canales iónicos.

    Los kits emplean un colorante de extinción de señal para reducir la fluorescencia de fondo y mejorar la relación señal-ruido. Molecular Devices ofrece en exclusiva la tecnología de extinción de señal patentada (número de patente U.S. 6 420 183 número de patente EPO 0 906 572) para los investigadores en ciencias de la vida y descubrimiento de fármacos, mediante la adquisición de los kits de ensayo FLIPR.

Opciones de pedido de los kits de ensayo FLIPR Membrane Potential

Kit de ensayo FLIPR Membrane Potential

Evaluation Kit - N.º ref.: R8128

  • (5) viales de Componente A* para Blue
  • (5) viales de Componente A* para Red
  • (1) frasco de tampón de ensayo 1X (Componente B)

* Cada vial de reactivo (Componente A) es suficiente para 1 placa (96, 384 o 1536 pocillos). Cada kit es suficiente para 10 placas.

N.º R8128

$671.00 USD

1

Kit Explorer ROJO - Ref.: R8126

  • (10) viales de Componente A*
  • (1) frasco de tampón de ensayo 1X (Componente B)

* Cada vial de reactivo (Componente A) es suficiente para 1 placa (96, 384 o 1536 pocillos). Cada kit es suficiente para 10 placas.

N.º R8126

$671.00 USD

1

Kit Bulk ROJO - Ref.: R8123

  • (10) viales de Componente A*
  • (1) frasco de tampón de ensayo 10X (Componente B)

* Cada vial de reactivo (Componente A) es suficiente para 10 placas (96, 384 o 1536 pocillos). Cada kit es suficiente para 100 placas.

N.º R8123

$3,426.00 USD

1

Kit Explorer AZUL - Ref.: R8042

  • (10) viales de Componente A*
  • (1) frasco de tampón de ensayo 1X (Componente B)

* Cada vial de reactivo (Componente A) es suficiente para 1 placa (96, 384 o 1536 pocillos). Cada kit es suficiente para 10 placas.

N.º R8042

$671.00 USD

1

Kit Bulk AZUL - Ref.: R8034

  • (10) viales de Componente A*
  • (1) frasco de tampón de ensayo 10X (Componente B)

* Cada vial de reactivo (Componente A) es suficiente para 10 placas (96, 384 o 1536 pocillos). Cada kit es suficiente para 100 placas.

N.º R8034

$3,426.00 USD

1

Recursos de los kits de ensayo FLIPR Membrane Potential