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Desarrollo de líneas celulares

Desarrollo de líneas celulares

Las líneas celulares estables se utilizan ampliamente en muchas aplicaciones importantes que incluyen la producción de fármacos biológicos (p. ej., proteínas recombinantes y anticuerpos monoclonales), cribado de fármacos y estudios funcionales de genes. El proceso de desarrollo de líneas celulares estables a menudo comienza con la transfección de células huésped seleccionadas, normalmente CHO o células HEK293, con los plásmidos deseados. Después de la transfección, los investigadores criban y cuantifican los clones que muestran alta expresión. Una vez identificados estos altos productores, se validan las líneas celulares o las proteínas producidas por las células.

Los métodos de cribado manual utilizados tradicionalmente para el desarrollo de líneas celulares requieren mucho tiempo y trabajo, generándose una gran demanda de soluciones automáticas de alto rendimiento para tales trabajos. El siguiente flujo de trabajo general ayuda a identificar los sistemas que pueden ayudarle en su investigación.

 

 

Flujo de trabajo de líneas celulares

 

Proceso de desarrollo de líneas celulares:

  1. Transfección es el proceso de introducir un ADN extraño (que codifica la proteína recombinante de interés) dentro de una célula huésped. Una pequeña población de células con el ADN extraño integrado dentro de su genoma que mantienen su capacidad de expresar la proteína recombinante durante largos periodos de tiempo se conocen como células transfectadas estables.

  2. Cribado/clasificación del título de anticuerpos – Descubrimiento y selección de clones de alto valor a partir de un conjunto de células transfectadas. Realizar cribados de poblaciones grandes mediante la cuantificación de la expresión en la superficie celular de la proteína de interés o de la secreción de anticuerpos (clasificación del título) incrementará la probabilidad de encontrar un ligando de alta afinidad o un productor alto.

  3. Aislamiento de una única célula y viabilidad celular – Se deben aislar y clonar células viables únicas para garantizar que la población celular es genéticamente idéntica, lo que reduce significativamente la heterogeneidad de la expresión.

  4. Garantía de monoclonalidad – Cuando se desarrollan líneas celulares para biofármacos, es fundamental desde una perspectiva de calidad y reglamentaria garantizar que la línea celular procede de un único progenitor y que es, por tanto, monoclonal. La documentación de la monoclonalidad (una medida reglamentaria para líneas celulares terapéuticas) normalmente se basa en imágenes, por lo que se registra una imagen de una única célula y se incluye en las presentaciones reglamentarias.

  5. Cribado de la productividad y titulación de clones – Esta es una prueba que detecta la cantidad de proteína recombinante o anticuerpos producidos por la línea celular derivada clonalmente.

 

 

Aplicaciones y métodos para el desarrollo de líneas celulares

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