Descubrimiento de anticuerpos monoclonales (AcM)
Los anticuerpos monoclonales (AcM) se originan a partir de una única célula parental, por lo que se unen exclusivamente a un único epítopo. El descubrimiento de anticuerpos monoclonales normalmente hace referencia al cribado e identificación de anticuerpos que reconocen un epítopo específico para el diagnóstico y tratamiento de enfermedades, como el coronavirus para la COVID-19.
Existen varias estrategias para generar AcM terapéuticos. Dos de los métodos de producción más frecuentes son la obtención de hibridomas y el despliegue de fagos.
Producción de AcM mediante hibridomas
En este método, los científicos fusionan células de mieloma inmortalizadas con esplenocitos obtenidos de animales previamente expuestos al antígeno de interés. La célula fusionada resultante se denomina hibridoma. La ventaja de un hibridoma es que ahora posee la capacidad de producir AcM a la vez que se divide indefinidamente, mientras que los esplenocitos tienen una vida limitada. A continuación, los investigadores realizan el cribado de hibridomas para identificar los óptimos en función de la especificidad por el antígeno y la clase de inmunoglobulina. Seguidamente, estos candidatos son analizados y caracterizados, y se aumenta su escala de producción para procesos posteriores.
Producción de AcM mediante despliegue de fagos
En este método, los genes de las cadenas pesada y ligera de un anticuerpo se introducen en el gen de una proteína de la cubierta de un bacteriófago, dando lugar a fagos que expresan (“despliegan”) el anticuerpo en su superficie. Utilizando esta estrategia, los científicos pueden generar una biblioteca de anticuerpos que despliega millones de anticuerpos diferentes. Se hace un cribado de estos fagos frente al antígeno de interés y aquellos que son altamente específicos son identificados, aislados y caracterizados adicionalmente para el trabajo posterior.
¿Cómo se producen los anticuerpos monoclonales?
El proceso de producción de anticuerpos monoclonales (AcM) tradicional normalmente comienza con la generación de células productoras de AcM (es decir, hibridomas) mediante la fusión de células de mieloma con los esplenocitos productores de anticuerpo deseados (es decir, linfocitos B). Estos linfocitos B proceden en general de animales, normalmente ratones. Tras la fusión celular, se realiza el cribado de grandes cantidades de clones y se seleccionan en función de la especificidad por el antígeno y la clase de inmunoglobulina. Una vez identificadas las líneas celulares de hibridoma candidatas, cada “acierto” se confirma, se valida y se caracteriza mediante una serie de ensayos funcionales posteriores. Tras finalizar, los clones se aumentan de escala donde se producen los bioprocesos posteriores adicionales.
Recursos adicionales para el descubrimiento de anticuerpos
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Desarrollo de líneas celulares
El desarrollo de líneas celulares es un paso crítico en el proceso de generación de moléculas biofarmacéuticas, como los anticuerpos monoclonales. El proceso a menudo comienza con la transfección del tipo de célula huésped con el ADN que codifica la proteína terapéutica de interés, permitiendo la integración aleatoria o dirigida del ADN diana en el genoma de la célula huésped. Se realiza el cribado de miles de clones para aislar las escasas células que son altas productoras, un proceso manual que requiere mucho tiempo.
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Comparación de métodos de clonación tradicionales frente a f.sight
En este estudio, realizamos seis grupos de experimentos, clonando dos líneas celulares CHO con medios de cultivo celular sin componentes de origen animal y suplementos, y comparamos el rendimiento de una impresora de células individuales CloneSelect™ f.sight con el de otros dos métodos de clonación aceptados (citometría de flujo y dilución límite).
Vea nuestro vídeo de introducción y descárguese la nota de aplicación.
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Identificación segura de células CHO-S monoclonales
El crecimiento de células CHO en medio CloneMedia CHO Growth A es una forma más eficiente de clonar células CHO que realizar la dilución límite en medio líquido. Los medios semisólidos inmovilizan las células, lo que evita que estas se muevan durante la manipulación habitual. Esto permite a los investigadores hacer un seguimiento fiable del crecimiento de una única célula dentro de la colonia.
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eBook: Optimice sus líneas celulares de alto valor
En este eBook presentamos una descripción general del flujo de trabajo para el desarrollo de líneas celulares, así como soluciones de alto rendimiento para acelerar el proceso y permitir una selección más fácil y rápida de las líneas de células de mamífero de alta producción.
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Desarrollo mejorado de hibridomas específicos de virus
Los virus de ADN bicatenario (ADNbc) causan diversas enfermedades en seres humanos. Las especies que pertenecen al orden de Herpesvirus y las familias de Adenovirus y Papillomavirus pueden causar síntomas en humanos con manifestaciones similares. Asimismo, la confirmación serológica y diagnóstica basada en proteínas para un virus en particular puede ser complicada debido a la conservación de antígenos en los genomas virales. Un alto grado de homología proteómica y reactividades cruzadas del suero conllevan una mala diferenciación entre especies individuales de virus de ADNbc. El objetivo de la investigación fue identificar una línea celular productora óptima que secretara un anticuerpo monoclonal altamente específico sin reactividad cruzada para su uso en el desarrollo de tratamientos biológicos.
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Selección de hibridomas utilizando medio HAT
La selección de hibridomas después de la fusión de mielomas y células de bazo es un paso crítico en la producción de anticuerpos monoclonales. A menudo, los científicos utilizan el método de HAT (hipoxantina-aminopterina-timidina) para llevar a cabo esta tarea.
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Tecnología de hibridomas
La tecnología de hibridomas es un método para la producción en masa de anticuerpos en una línea celular híbrida generada a partir de la fusión de linfocitos B productores de anticuerpo con una línea celular de mieloma inmortalizada, que ahora se denomina célula de hibridoma. Puesto que cada linfocito B produce un anticuerpo único, la clonación de células únicas de hibridomas se puede utilizar para generar una biblioteca diversa de anticuerpos monoclonales únicos a gran escala, que se usan frecuentemente en la prevención, diagnóstico y tratamiento de enfermedades.
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Monoclonalidad
El desarrollo de líneas celulares y la garantía de monoclonalidad son pasos críticos en el proceso de generación de moléculas biofarmacéuticas, como los anticuerpos monoclonales. Tras el aislamiento de una única célula viable con una sólida expresión de la proteína de interés, se puede establecer una línea celular. Un hito clave en este proceso es documentar la prueba de clonalidad. La documentación de la clonalidad normalmente se basa en imágenes, por lo que se toma una imagen de una única célula y se incluye en las presentaciones reglamentarias.
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Despliegue de fagos
El despliegue de fagos es una técnica utilizada para estudiar la interacción de proteínas desplegadas en la superficie de un bacteriófago con otras moléculas, como péptidos, ADN y otras proteínas. El despliegue de fagos se emplea habitualmente para encontrar interacciones de alta afinidad entre anticuerpos y antígenos, lo cual es crítico en la patogénesis de virus, vacunas y otros tratamientos.
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Preparación y siembra de células en medio semisólido
La siembra de células en medio semisólido viscoso puede ser complicada cuando se usa por primera vez. Vea nuestro tutorial de 4 minutos para aprender algunos consejos y trucos sobre cómo sembrar células en este medio de forma más eficaz.
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