Generación de líneas celulares estables para la producción de vacunas
Optimice su flujo de trabajo para la generación de líneas celulares estables
El desarrollo de líneas celulares estables es el proceso mediante el cual se establece una población de células derivada de un único clon que se ha modificado utilizando ingeniería genética para expresar un fenotipo deseado (p. ej., la producción de grandes cantidades de proteína recombinante) durante un periodo estable de tiempo. Las células individuales proliferan formando colonias en las que se puede evaluar posteriormente la característica deseada.
En este vídeo, Justin Dranschak, director de las plataformas para biofarmacéutica, presenta nuestro flujo de trabajo para el desarrollo de una línea celular estable y hace referencia a los sistemas que pueden ayudarlo en sus investigaciones.
Paso 1: Transfección estable
El proceso de desarrollo de una línea celular comienza con la introducción de ADN extraño (que codifica la proteína recombinante de interés) en una célula huésped, un proceso conocido como transfección. Una vez realizada la transfección, las células comienzan a expresar la proteína durante un periodo transitorio (normalmente menos de una semana) antes de interrumpir la producción por completo. Sin embargo, una pequeña subpoblación mantiene su capacidad de expresar la proteína recombinante durante largos periodos de tiempo debido a la integración del ADN extraño dentro de su genoma. Estas células se conocen como células transfectadas estables y se seleccionan para pasar a la siguiente fase.
Paso 2: Enriquecimiento del pool
El ADN extraño que codifica la proteína de interés a menudo incluye un marcador seleccionable adicional que se puede utilizar para separar las células transfectadas estables de las células no transfectadas. Por ejemplo, a menudo se añade la proteína verde fluorescente (GFP) al ADN extraño de modo que las células transfectadas muestran fluorescencia y se pueden diferenciar de las células no transfectadas que no tienen fluorescencia. Existe una fuerte correlación entre los niveles de expresión de la proteína recombinante y el marcador GFP incluido en el ADN extraño, lo que permite a los investigadores utilizar la intensidad de fluorescencia de GFP para identificar y enriquecer los pooles de células que muestran una alta expresión de proteína.
Paso 3: Aislamiento de células individuales
El proceso de transfección estable, ya sea dirigida o aleatoria, generará una población de células con expresión heterogénea de la proteína. Por tanto, se deben aislar y clonar células individuales para garantizar que la población celular sea genéticamente idéntica, lo que reduce significativamente la heterogeneidad de la expresión. El aislamiento de células individuales es el proceso de separar células vivas individuales a partir de un bloque sólido de tejido o de una suspensión de células para su posterior análisis.
Paso 4: Verificación de la monoclonalidad y crecimiento celular
La clonación de célula única es una fase extremadamente crítica del proceso de desarrollo de líneas celulares. Es importante verificar que se aíslan correctamente unas células individuales de otras dentro de una microplaca, lo que a menudo se documenta usado un generador de imágenes. Habitualmente se monitoriza el crecimiento de las células después de la fase de clonación para garantizar que sus propiedades de crecimiento no han cambiado de forma drástica. Esto incluye el proceso de seguimiento del progreso de una única célula a una colonia de células.
Paso 5: Título y cribado de CQA
Esta es una prueba que detecta la cantidad de proteína recombinante o anticuerpos producidos por la línea celular derivada de un único clon.
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