¿Qué son los ácidos nucleicos?
Los ácidos nucleicos son biomoléculas grandes comunes para todas las formas de vida. En general se encuentran en la naturaleza de dos formas: ácido desoxirribonucleico (ADN) y ácido ribonucleico (ARN).
Diferencia entre el ADN y el ARN
El ADN y el ARN están compuestos de nucleótidos, cada uno de los cuales consta de un azúcar de 5 átomos de carbonos, una base nitrogenada y un grupo fosfato. El ADN consta de una cadena doble de pares de nucleótidos, mientras que el ARN normalmente está formado por una cadena sencilla. En el ADN, los nucleótidos son adenina, citosina, guanina y timina, mientras que el ARN contiene uracilo en lugar de timina. Las secuencias de nucleótidos del ADN se organizan en unidades llamadas genes, que contienen la información que codifica cada proteína. El ADN de un gen se transcribe para formar una copia de ARN del gen, que sirve como molde para la síntesis de la proteína.
El daño y la presencia en el ADN de mutaciones que alteran la secuencia de los genes pueden tener como consecuencia el mal funcionamiento de las proteínas, lo que altera la función celular normal. El cáncer es un buen ejemplo de cómo las mutaciones genéticas pueden alterar la regulación normal del comportamiento celular, lo que conduce al crecimiento incontrolado de las células. La investigación de la función de los genes y los cambios genéticos que causan enfermedades continuará teniendo como fruto nuevos tratamientos.
Métodos de cuantificación de ácidos nucleicos
El ácido nucleico a menudo se purifica a partir de células como parte de un conjunto cada vez mayor de métodos de biología molecular, entre ellos la secuenciación y la edición génica. Antes de poder usarlos en aplicaciones posteriores, los ácidos nucleicos se detectan y cuantifican mediante espectrofotometría UV y de fluorescencia. El análisis de las muestras, que tradicionalmente se medían individualmente en cubetas, ahora se realiza de forma rutinaria en microplacas.
Molecular Devices ofrece una solución de flujo de trabajo completo para la detección, cuantificación y análisis de ácidos nucleicos. En nuestras notas de aplicación se muestra la cuantificación y análisis de ácidos nucleicos en un formato de microplaca, lo que ofrece un mayor rendimiento en comparación con otros métodos, así como el cálculo automático de los resultados.
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Mediciones de la absorbancia del ADN/ARN
La absorbancia de una muestra de ADN medida a 260 nm en un espectrofotómetro o lector de microplacas puede utilizarse para calcular su concentración. La cuantificación de la absorbancia del ADN funciona en muestras cuya concentración oscila de aproximadamente 0,25 µg/ml a aproximadamente 125 µg/ml en un formato de microplaca.
Descubra cómo se mide la absorbancia en nuestros lectores de microplacas de absorbancia con nuestras notas de aplicación destacadas:
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eBook: Cuantificación de ácidos nucleicos y proteínas
Optimice los ensayos de absorbancia para la cuantificación de proteínas y ácidos nucleicos
Los lectores de microplacas de absorbancia se utilizan ampliamente en investigación básica, descubrimiento de fármacos, validación de bioensayos, control de calidad y procesos de fabricación en las industrias farmacéutica, biotecnológica, de alimentos y bebidas y en el sector académico. Estos lectores proporcionan unas medidas rápidas y sensibles de una serie de analitos en un gran intervalo de concentraciones para una gran variedad de ensayos, como ELISA, proliferación microbiana, detección de compuestos y contaminantes clave y cuantificación de proteínas.
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Cuantificación fluorimétrica de ácidos nucleicos
La cuantificación del ADN es una etapa crítica en biología molecular que requiere exactitud, fiabilidad y el uso de volúmenes cada vez más pequeños para aplicaciones como la secuenciación de última generación. En comparación con la cuantificación espectrofotométrica del ADN, el método fluorimétrico proporciona ventajas clave como una sensibilidad significativamente mayor, alta selectividad por el ADN bicatenario (ADNbc) por encima del ADN monocatenario (ADNmc) o del ARN y mayor tolerancia a contaminantes (proteínas e hidratos de carbono).
Aquí encontrará algunas notas de aplicación sobre la cuantificación fluorimétrica de ácidos nucleicos que le pueden resultar interesantes:
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Genotipado de SNP
El genotipado es un proceso para analizar las diferencias genéticas entre individuos mediante el examen de sus secuencias de ADN. Los polimorfismos de nucleótido único (single nucleotide polymorphyms, SNP) son uno de los tipos más frecuentes de variación genética que consiste en la mutación de un único nucleótido en un locus específico. Se ha demostrado que el genotipado de SNP es muy útil para la identificación de mutaciones relacionadas con enfermedades en diferentes especies y, como consecuencia, se han desarrollado muchas técnicas para la detección de SNP.
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