Electrofisiología patch-clamp
Origen de la famosa guía de Axon:
Guía de técnicas del laboratorio de electrofisiología y biofísica
Electrofisiología patch-clamp
La técnica de fijación en parche de membrana (patch-clamp) es una versátil herramienta electrofisiológica para entender el comportamiento de los canales iónicos. Todas las células expresan canales iónicos, pero las células que con más frecuencia se estudian con técnicas de patch-clamp son las neuronas, fibras musculares, cardiomiocitos y ovocitos que sobreexpresan canales de iones individuales.
Para evaluar la conductancia de canales de iones individuales, con un microelectrodo se forma un sellado de alta resistencia con la membrana celular y se retira un parche de la membrana celular que contiene el canal iónico de interés. Alternativamente, mientras se sella el microelectrodo a la membrana celular, este pequeño parche se puede romper permitiendo el acceso eléctrico del electrodo a la célula entera. A continuación se aplica voltaje, formándose una fijación de voltaje (voltage clamp) y se mide la corriente de la membrana. También se puede usar fijación de corriente (current clamp) para medir los cambios en el voltaje de la membrana denominado potencial de membrana. El cambio de voltaje o corriente dentro de las membranas celulares se puede alterar aplicando compuestos para bloquear o abrir canales. Estas técnicas permiten a los investigadores entender cómo se comportan los canales iónicos, tanto en estado normal como patológico, y cómo los diferentes fármacos, iones y otros analitos pueden modificar estas condiciones.
Flujo de trabajo de patch-clamp usando instrumentos Axon
El catálogo de Axon Instruments® proporciona soluciones completas para patch-clamp que incluyen amplificadores, digitalizadores, software y accesorios. Nuestros instrumentos, los mejores de su clase, facilitan la variedad completa de experimentos con la técnica patch-clamp, desde los registros más pequeños de canales individuales a los registros macroscópicos más grandes. La adición del paquete de software Axon pCLAMP 11 crea un flujo de trabajo optimizado que permite experimentos sofisticados y eficientes y la generación de datos de alta calidad Más información sobre la configuración del laboratorio de electrofisiología >
- Preparar soluciones: hacer soluciones internas y externas. Ajustar los valores de osmolaridad y pH.
- Preparar las células o cortes de cerebro: preparar células en cultivo, neuronas aisladas, cortes de cerebro o animales completos.
- Estirar y pulir la pipeta: preparar el electrodo de registro. Estirar el tubo capilar de vidrio y pulir la punta de la pipeta.
- Configurar el sistema de perfusión: configurar el sistema de perfusión y el software de adquisición de datos. Asegurarse de que el sistema está blindado.
- Pinzar una célula: utilizar el manipulador para tocar la membrana celular con la pipeta. Asegurarse de que se forma un sello eléctrico de alta resistencia.
- Adquisición y amplificación de la señal: la señal se amplificará. Para obtener mejores resultados, asegurarse de usar el tipo correcto de amplificador para la investigación.
- Digitalización de la señal: la señal analógica es digitalizada para poder analizarla.
- Adquisición y análisis de los datos: con el paquete de software pCLAMP 11 se pueden programar protocolos más largos y sofisticados para obtener un análisis más rápido de los datos y mediciones precisas.
Enlaces rápidos a los fundamentos de la electrofisiología patch-clamp:
Más información sobre las técnicas de patch-clamp, desde registro de canales individuales a registros de células completas y potencial de campo extracelular.