Detección, cuantificación y análisis de proteínas
La detección, cuantificación y análisis de proteínas son cruciales para investigar una gran variedad de procesos biológicos. La medición de la concentración de proteína es necesaria en procesos que abarcan desde la purificación y marcaje de proteínas hasta la preparación de muestras para electroforesis.
La cuantificación de proteínas es la medición de la concentración de proteína total en una muestra. Las proteínas se pueden cuantificar directamente mediante absorbancia a 280 nm, o indirectamente mediante métodos colorimétricos (BCA, Bradford, etc.) o fluorimétricos que ofrecen ventajas como una mayor sensibilidad. Para identificar y medir una proteína específica dentro de una muestra compleja, por ejemplo, suero o lisado celular, puede utilizarse un ensayo de inmunoadsorción ligado a enzima (ELISA).
La señalización celular y otros procesos biológicos pueden analizarse usando proteínas fluorescentes. Por ejemplo, la proteína fluorescente verde (GFP) puede expresarse en células vivas y utilizarse para visualizar la localización y la dinámica de proteínas en condiciones experimentales. El triptófano, un aminoácido cuyas propiedades de emisión de fluorescencia se ven afectadas por su microambiente, también se ha utilizado para obtener información sobre los cambios en el estado conformacional de las proteínas.
Métodos de cuantificación y análisis de proteínas
Los lectores de microplacas con modos de detección de absorbancia, fluorescencia y luminiscencia proporcionan una solución versátil para la cuantificación y el estudio de proteínas. Nuestras notas de aplicaciones demuestran cómo se pueden usar estos instrumentos para obtener y analizar resultados.
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eBook: Cuantificación de ácidos nucleicos y proteínas
Optimice los ensayos de absorbancia para la cuantificación de proteínas y ácidos nucleicos
Los lectores de microplacas de absorbancia se utilizan ampliamente en investigación básica, descubrimiento de fármacos, validación de bioensayos, control de calidad y procesos de fabricación en las industrias farmacéutica, biotecnológica, de alimentos y bebidas y en el sector académico. Estos lectores proporcionan unas medidas rápidas y sensibles de una serie de analitos en un gran intervalo de concentraciones para una gran variedad de ensayos, como ELISA, proliferación microbiana, detección de compuestos y contaminantes clave y cuantificación de proteínas.
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ELISA
Los ensayos de inmunoadsorción ligados a enzima (ELISA) se utilizan para medir la cantidad de una proteína específica, usando un formato de microplaca, y los resultados se detectan frecuentemente a través de la absorbancia en el rango de longitudes de onda visibles. Los formatos de ELISA quimioluminiscentes y fluorescentes ofrecen sensibilidad mejorada para una cuantificación exacta de analitos menos abundantes.
ELISA
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Aplicaciones de proteínas fluorescentes
Las proteínas de las células eucariotas están en un estado dinámico, en un equilibrio muy regulado entre la síntesis y la degradación. Mientras que la síntesis de proteínas se conoce bien tras décadas de estudio, solo en las últimas dos décadas se han hecho avances importantes en el conocimiento que tenemos de la degradación de proteínas. Las proteínas fluorescentes se pueden utilizar como indicadores para investigar la degradación de proteínas y las vías de señalización celular relacionadas.
Descubra cómo se han utilizado los sensores de proteosomas fluorescentes en nuestras notas de aplicación.
- Requisitos de multiplexado de indicadores fluorescentes y quimioluminiscentes de células vivas para analizar la transducción de señales mediada por NFkB
- Medición de la inhibición de proteosomas en células vivas en los lectores de microplacas Analyst® GT, FLEXstation® y Gemini EM usando el sensor de proteosomas de BD Biosciences
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Cuantificación de IgG
La medición exacta y fiable del título de anticuerpos monoclonales (p. ej., IgG) es esencial en el desarrollo y posterior fabricación de muchos fármacos biológicos. El ensayo Valita®TITER mide concentraciones de IgG desde 2,5 a 100 mg/l o de 100 a 2000 mg/l, utilizando un formato “mezclar y leer” de alto rendimiento con lecturas de polarización de fluorescencia (PF). Los lectores de microplacas multimodo SpectraMax con el modo de detección PF se han validado para su uso con los ensayos ValitaTITER. Para más información sobre la configuración optimizada de cada lector, consulte nuestra nota de aplicación:
Cuantificación de IgG
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Medición de la concentración de proteínas (Bradford, BCA, etc.)
La concentración de proteína se puede medir directamente, mediante la absorbancia a 280 nm en un espectrómetro UV, o indirectamente, usando métodos colorimétricos como ensayos de BCA o Bradford. Las proteínas se pueden cuantificar incluso con métodos fluorimétricos.
Aquí encontrará algunas notas de aplicación sobre la cuantificación de proteínas que le pueden resultar interesantes:
- Optimización de la cuantificación de proteínas con BCA en el lector SpectraMax iD5
- Medición de proteínas totales en lisados celulares con el lector de microplacas SpectraMax ABS Plus
- Cuantificación de proteínas con el lector de microplacas EMax Plus
- Cuantificación directa de proteínas con la microplaca SpectraDrop Micro-Volume
- Uso del kit de proteínas NanoOrange con los lectores de microplacas SpectraMax
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Detección de triptófano
La fluorescencia intrínseca de las proteínas se debe a los aminoácidos aromáticos triptófano, tirosina y fenilalanina. La emisión del triptófano es predominante en las proteínas y es el más sensible a la polaridad de los solventes y al entorno local. El análisis de los cambios en la fluorescencia del triptófano puede proporcionar información sobre la desnaturalización y conformación de las proteínas.
En estas notas de aplicación demostramos el rendimiento de los lectores de microplacas multimodo SpectraMax® para ensayos que miden la fluorescencia intrínseca del triptófano.
Detección de triptófano
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En estas notas de aplicación demostramos el rendimiento de los lectores de microplacas multimodo SpectraMax® para ensayos que miden la fluorescencia intrínseca del triptófano.
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Inmunotransferencia
La inmunotransferencia es una técnica popular utilizada para la detección y cuantificación de proteínas. Más información sobre las diferentes técnicas utilizadas para detectar proteínas en membranas de inmunotransferencia, incluidos métodos colorimétricos, de fluorescencia y de quimioluminiscencia. También le presentaremos un novedoso y único sistema de detección de inmunotransferencia en un lector de microplacas multimodo.
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Optimice los ensayos de absorbancia para la cuantificación de proteínas y ácidos nucleicos
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Medición de proteínas totales en lisados celulares con el lector de microplacas SpectraMax ABS Plus
Measure total protein in cell lysates with SpectraMax ABS Plus Microplate Reader
La cuantificación de las concentraciones de proteínas a partir de lisados celulares es un paso clave para muchas aplicaciones posteriores, como las inmunotransferencias y los ensayos de inmunoadsorción ligados a enzima (ELISA).
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Nota de aplicación
Optimización de la cuantificación de proteínas con BCA en el lector SpectraMax iD5
Streamline BCA-based protein quantitation on the SpectraMax iD5 reader
Descubra cómo cuantificar un muestra de proteínas celulares con kits de ensayo de proteínas BCA en el lector de microplacas multimodo SpectraMax® iD5.
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Medición de la fluorescencia intrínseca del triptófano en el lector de microplacas SpectraMax iD3
Measure intrinsic tryptophan fluorescence on the SpectraMax iD3 microplate reader
La fluorescencia intrínseca de las proteínas se debe a los aminoácidos aromáticos triptófano, tirosina y fenilalanina. El triptófano, que muestra la excitación máxima en torno a 270-280 nm y tiene una emisión...
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Nota de aplicación
Detección de la fluorescencia intrínseca del triptófano con la plataforma de microplacas multimodo SpectraMax i3
Intrinsic tryptophan detection with the SpectraMax i3 Multi-Mode Microplate Platform
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Nota de aplicación
Uso del kit de proteínas NanoOrange con los lectores de microplacas SpectraMax
Using the NanoOrange Protein Kit with SpectraMax Microplate Readers
En esta nota de aplicación se describe cómo usar el kit de cuantificación de proteínas NanoOrange® de Life Technologies en los lectores de microplacas SpectraMax® con el modo de detección de fluorescencia y el software...
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Cuantificación de proteínas con el lector de microplacas EMax Plus
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Los lectores de punto final son prolíficos en el laboratorio, ya que la absorbancia se ha convertido en la detección de elección para muchas aplicaciones. Los ejemplos incluyen ELISA para la cuantificación de citoquinas y determinación...
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Requisitos de multiplexado de indicadores fluorescentes y quimioluminiscentes de células vivas para analizar la transducción de señales mediada por NFkB
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El sistema de indicador quimioluminiscente Ready-To-Glow Secreted Metridia Luciferase de Clontech Laboratories se empleó para monitorizar la activación del elemento de respuesta NFκB por TNF-a y...
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Medición de la inhibición de proteosomas en células vivas en los lectores de microplacas Analyst® GT, FLEXstation® y Gemini EM usando el sensor de proteosomas de BD Biosciences
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