¿Qué es un ELISA?
Existen cuatro tipos principales de ELISA: directo, indirecto, competitivo y tipo sándwich. Cada tipo se describe a continuación con un diagrama que ilustra cómo se unen y se utilizan los analitos y los anticuerpos.
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ELISA directo
En un ELISA directo, el antígeno se une al fondo del pocillo de la microplaca y, a continuación, se añade un anticuerpo específico del antígeno, conjugado a su vez a una enzima u otra molécula que permita su detección.
ELISA indirecto
En un ELISA indirecto, el antígeno se une al fondo del pocillo de la microplaca y posteriormente se añade un anticuerpo específico del antígeno. A continuación se une al primer anticuerpo un anticuerpo secundario conjugado con una enzima u otra molécula de detección.
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ELISA competitivo
En un ELISA competitivo se une al fondo del pocillo de la microplaca un antígeno de referencia. Se añade a los pocillos la muestra más el anticuerpo y si existe un antígeno presente en la muestra, compite con el antígeno de referencia por la unión al anticuerpo. El material no unido se elimina con los lavados. Cuanto más antígeno hay en la muestra, menos anticuerpo termina unido al fondo de los pocillos a través del antígeno de referencia y, por tanto, menos señal.
ELISA tipo sándwich
En el ELISA tipo sándwich se usan dos anticuerpos específicos de dos epítopos diferentes presentes en el antígeno diana. El anticuerpo de captura se une al fondo del pocillo de la microplaca uniéndose a uno de los epítopos del antígeno. El anticuerpo de detección se une a un epítopo diferente del antígeno y está conjugado a una enzima que permite su detección. (Si el anticuerpo de detección no está conjugado, entonces se necesita un anticuerpo de detección secundario conjugado con una enzima).
Pasos para realizar un ensayo de ELISA tipo sándwich
La mayoría de los ELISA tipo sándwich se realizan en microplacas, en las que el fondo de los pocillos de la placa sirve de superficie sólida a la que se unen los anticuerpos y otros reactivos. Se utiliza un lavador de microplacas para eliminar el material inespecífico de los pocillos y con un lector de absorbancia de microplacas de ELISA se detecta el cambio de color que se produce cuando el antígeno diana está presente. Para representar las curvas patrón y calcular los resultados se utiliza un software de lector de placas.
En la siguiente ilustración se muestra un flujo de trabajo para un ensayo de ELISA tipo sándwich típico:
Paso 1: El anticuerpo de captura se une a los pocillos de la placa de ELISA.
Paso 2: Añadir la muestra al pocillo – El antígeno contenido en la muestra se une al anticuerpo de captura.
Paso 3: Lavar la microplaca – El material no unido se elimina mediante el lavado, dejando solo el antígeno de interés.
Paso 4: Añadir el anticuerpo de detección – El anticuerpo de detección conjugado con enzima se une a un segundo sitio en el antígeno de interés.
Paso 5: Lavar la microplaca – Los anticuerpos no unidos se eliminan mediante el lavado, dejando solo los anticuerpos específicos de la diana de interés.
Paso 6: Añadir el sustrato – La enzima transforma el sustrato sobre el anticuerpo de detección, produciendo un cambio de color.
Paso 7: Leer la placa – El lector de microplacas detecta el producto de la reacción de color y genera valores de densidad óptica (DO).
Paso 8: Calcular los resultados – Se calcula y analiza la cantidad de antígeno que hay en cada muestra.
Aunque es fácil configurar un ELISA, el procedimiento de ensayo es largo y laborioso. La automatización del laboratorio durante flujos de trabajo de alto rendimiento con placas puede ayudar a proporcionar tiempo libre, aumentar el rendimiento, la efectividad y la eficiencia del procedimiento de ensayo y la reproducibilidad.
Ver protocolo de ELISAFlujo de trabajo automatizado de ELISA
Ensayos de ELISA y aplicaciones
El ensayo de inmunoadsorción ligado a enzima es una técnica analítica usada con frecuencia en muchos laboratorios biotecnológicos y de investigación. A continuación encontrará una colección de notas de aplicación, investigación y tecnología relacionadas con ensayos de ELISA y aplicaciones significativas.
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ELISA quimioluminiscente de VEGF
Los factores de crecimiento endotelial vascular (VEGF) constituyen una familia de polipéptidos secretados implicados en el desarrollo vascular en mamíferos y en procesos patológicos que implican el crecimiento anómalo de vasos sanguíneos.
Leer Nota de aplicación: ELISA quimioluminiscente de VEGF con el luminómetro de microplacas SpectraMax L
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Determinación de aflatoxina en cannabis
Aquí demostramos cómo se puede usar el kit de ELISA AgraQuant Total Aflatoxin 4/40 junto con el lector de microplacas SpectraMax® ABS Plus y el lector de microplacas multimodo SpectraMax® iD5 para analizar los niveles de aflatoxinas B1, B2, G1 y G2 en uno de los productos más comunes del cannabis, la flor.
Leer Nota de aplicación: Determinación de la aflatoxina total en el cannabis usando un método de ELISA
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Resultados más rápidos con kits de ELISA
Un protocolo típico de ELISA es largo, con múltiples pasos de incubación y lavado. Los kits de ELISA CatchPoint SimpleStep proporcionan a los usuarios un flujo de trabajo de ELISA de 90 minutos, una reducción de tiempo de casi dos tercios en comparación con los ELISA tradicionales.
Leer Nota de aplicación: Resultados de ELISA más rápidos con los kits de ELISA CatchPoint SimpleStep
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Alimentos y bebidas
Para garantizar la calidad, autenticidad y seguridad, los fabricantes de alimentos y bebidas deben realizar una gran variedad de pruebas en sus productos. Muchas de estas pruebas se basan en el ELISA, que se utiliza en áreas tan diversas como la verificación de la presencia de endotoxinas bacterianas, micotoxinas, varios alérgenos, hormonas estimulantes del crecimiento y antibióticos, y para identificación de especies de carne. También se pueden emplear otras pruebas de absorbancia para cuantificar los niveles de sustancias en los alimentos, como azúcares, fenoles y ácidos.
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Cuantificación del gluten en la cerveza
Se analizaron los niveles de gliadina en seis cervezas disponibles en el mercado para determinar los niveles de gluten con el ELISA competitivo RIDASCREEN Gliadin.
Leer Nota de aplicación: Cuantificación del gluten en la cerveza con un método de ELISA aprobado por la ASBC
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Historia del ELISA
Explore el origen del ELISA y cómo ha evolucionado a lo largo de los años para contribuir a algunos de los avances científicos más significativos de nuestro tiempo.
Leer el Blog: Historia del ELISA desde su establecimiento hasta la investigación de la COVID-19
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Cómo configurar un protocolo de ELISA de punto final
Este vídeo proporciona indicaciones paso a paso de cómo configurar un protocolo de punto final de ELISA en el software SoftMax Pro. El uso de la función de plantilla en un protocolo permite el análisis rápido y automático de los datos. El ajuste de la curva proporciona visualizaciones precisas de los resultados.
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Cómo configurar un ensayo de ELISA y realizar un análisis básico
Parte 1 de una serie de seminarios web en cuatro partes para introducir el software de adquisición y análisis SoftMax® Pro 7.1.1 GxP en el que se muestra lo fácil que es procesar sus ensayos y obtener resultados de forma rápida y fácil.
Tras una corta introducción, verá una demostración en vivo de cómo usar el software SoftMax Pro GxP y el lector de microplacas multimodo SpectraMax® iD3 para configurar y adquirir datos usando un ensayo de ELISA de ejemplo. Explicaremos la configuración del software necesaria para adquirir datos antes de comentar los fundamentos del análisis. Usaremos un conjunto de datos reales para introducir la reducción de datos, creando una plantilla y generando una curva patrón.
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Automatización de laboratorios para ensayos de alto rendimiento con placas
El ELISA (ensayo de inmunoadsorción ligado a enzima) es uno de los métodos cuantitativos más populares para detectar un antígeno diana, como una toxina o sustancias extrañas dentro de una muestra. El ensayo es fácil de configurar y la variedad de posibles analitos es enorme, pero el procedimiento del ensayo es largo y laborioso.
Los flujos de trabajo de automatización del laboratorio pueden ayudar proporcionándole tiempo libre y aumentando el rendimiento, la efectividad y la eficiencia del procedimiento de ensayo y la reproducibilidad.
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Detección de melamina con kits de ELISA
La base orgánica melamina se utiliza para hacer numerosos productos, como plásticos, retardantes de llama, pigmentos y fertilizantes. Recientemente se ha documentado la práctica de añadir melamina a los piensos para animales y a alimentos para consumo humano con el fin de incrementar el contenido aparente de proteína. Puesto que la melamina puede causar enfermedades graves o incluso la muerte, existe un interés creciente en métodos de identificación para detectar la contaminación con melamina en diferentes productos alimenticios.
Leer Nota de aplicación:
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Leer Nota de aplicación:
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Cuantificación de proteínas
Se realiza una comparación del rendimiento entre el lector de microplacas EMax Plus y el lector EMax Endpoint usando un ELISA tipo sándwich para cuantificar los niveles de la citoquina interleuquina-22 (IL-22 de ratón/rata).
Leer Nota de aplicación: Cuantificación de proteínas con el lector de microplacas EMax Plus
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Leer Nota de aplicación: Cuantificación de proteínas con el lector de microplacas EMax Plus
Cuantificación de interleuquina-8
Descubra cómo realizar el ELISA Human IL-8 SimpleStep en el lector de microplacas SpectraMax® ABS Plus usando un cómodo protocolo preconfigurado.
Leer Nota de aplicación: Cuantificación de las concentraciones de interleuquina-8 en el lector de microplacas SpectraMax ABS Plus con el kit de ELISA SimpleStep
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Flujo de trabajo de un protocolo de ELISA
El flujo de trabajo de un protocolo de ELISA tipo sándwich típico tiene múltiples pasos de adición de reactivos, incubación y lavado. Aquí destacamos cada paso y los instrumentos y herramientas necesarios para realizar el ensayo de ELISA, incluido un lavador de microplacas, lector de absorbancia de placas de ELISA y software.
EL ANTICUERPO DE CAPTURA SE UNE AL POCILLO
En primer lugar, el anticuerpo de captura se une al fondo del pocillo de la microplaca.
Placa de ELISA
La mayoría de los ELISA se realizan en microplacas de 96 o 384 pocillos, siendo la placa de 96 pocillos la que se usa con más frecuencia, por lo que también se denomina placa de ELISA. El fondo de los pocillos de la microplaca sirve de superficie sólida a la que se unen los anticuerpos y otros reactivos. Normalmente, las microplacas se incluyen en un kit de ELISA.
¿Quiere los resultados del ELISA más rápido?
Los kits de ELISA CatchPoint SimpleStep producen resultados en tan solo 90 minutos.
Más información
ADICIÓN DE LA MUESTRA
La muestra se añade al pocillo y el antígeno que contiene la muestra se une al anticuerpo de captura.
LAVADO DE LA MICROPLACA
El material no unido se elimina mediante lavado, dejando solo el antígeno de interés y minimizando la posibilidad de señal de fondo alta.
Lector y lavador de microplacas de ELISA
Solución completa para su flujo de trabajo para ELISA usando el lector de microplacas EMax Plus con el software de adquisición de datos SoftMax Pro y el lavador de microplacas MultiWash+.
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Ahorre tiempo y recursos con nuestro lavador AquaMax® y el sistema de manipulación de microplacas StakMax®
Pregúnteme cómo
ADICIÓN DE ANTICUERPO DE DETECCIÓN
El anticuerpo de detección conjugado con enzima se une a un segundo sitio en el antígeno de interés, lo que proporciona el medio para detectar el antígeno.
LAVADO DE LA MICROPLACA
Los anticuerpos no unidos se eliminan mediante el lavado, dejando solo los anticuerpos específicos de la diana de interés, lo que minimiza de nuevo la posibilidad de señal de fondo.
Lavador de placas de ELISA
Lavador de microplacas AquaMax: La aspiración y dispensación de las microplacas de 96 y 384 pocillos se produce simultáneamente en todos los pocillos, lo que tiene como resultado ensayos de gran precisión y un procesamiento más rápido de las microplacas sin necesidad de indexación mecánica de las placas ni procesamiento en cuadrantes.
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ADICIÓN DEL SUSTRATO
La enzima transforma el sustrato sobre el anticuerpo de detección, lo que produce un cambio de color, siendo la intensidad proporcional a la cantidad de antígeno presente.
Dependiendo de la enzima y el sustrato utilizados, la lectura también puede ser fluorescente o luminiscente.
LECTURA DE LA PLACA
El lector de microplacas detecta el producto de la reacción de color y genera valores de densidad óptica (DO) que indican cuánta luz absorbe el contenido de cada pocillo.
Lector de placas de ELISA
Un lector de placas de ELISA, como el lector de absorbancia de microplacas de ELISA SpectraMax ABS Plus, detecta el cambio de color producido cuando el antígeno diana está presente. Lo hace midiendo qué cantidad de la luz que pasa a través de los pocillos de la microplaca es absorbida por el material que contienen los pocillos. Cuanto más antígeno haya, mayor será el valor de la absorbancia.
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Software del lector de placas de ELISA
Se utiliza un software de lector de placas de ELISA, como nuestro software de análisis de datos SoftMax Pro, para representar las curvas patrón y calcular los resultados a partir de los valores de absorbancia proporcionados por el lector de microplacas.
Se procesa una curva patrón para poder calcular la cantidad de antígeno en cada muestra de forma exacta. Un protocolo preconfigurado ayuda a ahorrar tiempo calculando los resultados automáticamente.
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CÁLCULO DE LOS RESULTADOS
Se calcula la cantidad de antígeno que contiene cada muestra y se comparan muestras diferentes, por ejemplo, células sometidas a diferentes condiciones de tratamiento.
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Lavador de microplacas AquaMax
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