¿Qué es un ELISA?
El ELISA (ensayo de inmunoadsorción ligado a enzima) es un método utilizado para detectar cuantitativamente un antígeno en una muestra. Un antígeno es una toxina o cualquier otra sustancia extraña, por ejemplo, el virus de la gripe o un contaminante ambiental, que provoca que el sistema inmunitario de los vertebrados inicie una respuesta defensiva. La diversidad de antígenos potenciales es enorme, por lo que los ELISA se utilizan en muchas áreas de investigación y pruebas para detectar y cuantificar antígenos en una amplia variedad de tipos de muestra. Con los ELISA se pueden analizar sustancias específicas de interés en lisados celulares, muestras de sangre, alimentos y más.
Existen cuatro tipos principales de ELISA: directo, indirecto, competitivo y tipo sándwich. Cada tipo se describe a continuación con un diagrama que ilustra cómo se unen y se utilizan los analitos y los anticuerpos.
Pasos para realizar un ensayo de ELISA tipo sándwich
La mayoría de los ELISA tipo sándwich se realizan en microplacas, en las que el fondo de los pocillos de la placa sirve de superficie sólida a la que se unen los anticuerpos y otros reactivos. Se utiliza un lavador de microplacas para eliminar el material inespecífico de los pocillos y con un lector de absorbancia de microplacas de ELISA se detecta el cambio de color que se produce cuando el antígeno diana está presente. Para representar las curvas patrón y calcular los resultados se utiliza un software de lector de placas.
En la siguiente ilustración se muestra un flujo de trabajo para un ensayo de ELISA tipo sándwich típico:
Paso 1: El anticuerpo de captura se une a los pocillos de la placa de ELISA.
Paso 2: Añadir la muestra al pocillo: el antígeno contenido en la muestra se une al anticuerpo de captura.
Paso 3: Lavar la microplaca: el material no unido se elimina mediante el lavado, dejando solo el antígeno de interés.
Paso 4: Añadir el anticuerpo de detección: el anticuerpo de detección conjugado con enzima se une a un segundo sitio en el antígeno de interés.
Paso 5: Lavar la microplaca: los anticuerpos no unidos se eliminan mediante el lavado, dejando solo los anticuerpos específicos de la diana de interés.
Paso 6: Añadir el sustrato: la enzima transforma el sustrato sobre el anticuerpo de detección, produciendo un cambio de color.
Paso 7: Leer la placa: el lector de microplacas detecta el producto de la reacción de color y genera valores de densidad óptica (DO).
Paso 8: Calcular los resultados: se calcula y analiza la cantidad de antígeno que hay en cada muestra.
Aunque es fácil configurar un ELISA, el procedimiento de ensayo es largo y laborioso. La automatización del laboratorio durante flujos de trabajo de alto rendimiento con placas puede ayudar a proporcionar tiempo libre, aumentar el rendimiento, la efectividad y la eficiencia del procedimiento de ensayo y la reproducibilidad.
Ensayos de ELISA y aplicaciones
El ensayo de inmunoadsorción ligado a enzima es una técnica analítica usada con frecuencia en muchos laboratorios biotecnológicos y de investigación. A continuación encontrará una colección de notas de aplicación, investigación y tecnología relacionadas con ensayos de ELISA y aplicaciones significativas.
Recursos más recientes
Flujo de trabajo de un protocolo de ELISA
El flujo de trabajo de un protocolo de ELISA tipo sándwich típico tiene múltiples pasos de adición de reactivos, incubación y lavado. Aquí destacamos cada paso y los instrumentos y herramientas necesarios para realizar el ensayo de ELISA, incluido un lavador de microplacas, lector de absorbancia de placas de ELISA y software.