Análisis de la apoptosis mediante la adquisición automática de imágenes celulares
La apoptosis es un proceso de muerte celular programada importante en numerosos procesos biológicos como el desarrollo embrionario y el mantenimiento del tejido normal. La alteración en la regulación de la apoptosis se ha asociado a diversas enfermedades, como el cáncer. Los procesos bioquímicos provocan cambios característicos en la morfología celular, como retracción celular, fragmentación nuclear, condensación de la cromatina y degradación del ARNm y, finalmente, la muerte de la célula. La apoptosis se puede iniciar por medio de vías intrínsecas o extrínsecas, pero ambas vías inducen la muerte celular mediante la activación de las enzimas caspasas.
Una forma de analizar la apoptosis es detectar la caspasa-3 y la caspasa-7; ambas se activan durante la fase de ejecución de la apoptosis. Por ejemplo, el kit de ensayo EarlyTox™ Caspase-3/7 NucView 488 ofrece un sustrato que puede detectar la actividad caspasa-3/7 en células intactas. El sustrato consiste en un colorante fluorogénico de ADN que se acopla a la secuencia de reconocimiento DEVD de la caspasa-3/7. El sustrato, que inicialmente no es fluorescente, puede atravesar la membrana celular y entrar en el citoplasma. En las células apoptóticas, la caspasa-3/7 escinde el sustrato, liberando un colorante de ADN de alta afinidad que migra al núcleo de la célula y se une al ADN. La excitación a 500 nm da lugar a la emisión de fluorescencia verde brillante a 530 nm que se puede usar para evaluar el nivel de activación de las caspasas. De este modo, las células apoptóticas se pueden visualizar y cuantificar mediante la adquisición automática de imágenes.
Las células HeLa se trataron con el compuesto estaurosporina y se tiñeron con el 488kit de ensayo EarlyTox Caspase-3/7 NucView (verde). La superposición de la máscara (derecha) muestra las células apoptóticas identificadas en verde y las células no apoptóticas en rojo.
El análisis de las imágenes de células apoptóticas se puede realizar en el sistema de adquisición automática de imágenes celulares ImageXpress Pico, que cuenta con una plantilla preconfigurada de protocolo “Apoptosis” diseñada para adquirir y analizar las imágenes fácilmente. Se pueden calcular automáticamente resultados útiles, como el número y el porcentaje de células vivas y células apoptóticas. A continuación se muestra un flujo de trabajo típico para adquirir y analizar imágenes de placas de ensayo de apoptosis.
Flujo de trabajo típico para adquirir y analizar imágenes de células apoptóticas.
En resumen, las ventajas de usar el sistema ImageXpress Pico para ensayos de apoptosis incluyen:
- Permitir la visualización y la monitorización directa de la muerte celular.
- Permitir la evaluación objetiva de las células, obteniéndose de este modo resultados reproducibles.
- Determinar automáticamente resultados valiosos, como el número y porcentaje de células apoptóticas.
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