Descubrimiento de anticuerpos mediante despliegue de fagos
Despliegue de fagos
El despliegue de fagos es una técnica utilizada para estudiar la interacción de proteínas desplegadas en la superficie de un bacteriófago con otras moléculas, como péptidos, ADN y otras proteínas. El despliegue de fagos se emplea habitualmente para encontrar interacciones de alta afinidad entre anticuerpos y antígenos, la cual es crítica en la patogénesis de virus, vacunas y otros tratamientos.
Ver el vídeo con Rebecca Kreipke, científica de aplicaciones de campo, quien lo guiará a través de nuestra solución para acelerar su flujo de trabajo de despliegue de fagos.
Flujo de trabajo de despliegue de fagos
Soluciones automatizadas para incrementar la eficiencia del flujo de trabajo de despliegue de fagos
El flujo de trabajo de despliegue de fagos es un método sólido, sencillo y barato mediante el cual se pueden identificar fagos específicos que se unen con alta afinidad al antígeno a partir de bibliotecas combinatorias grandes que contienen miles de millones de anticuerpos potencialmente relevantes a nivel clínico. Esto lo hace especialmente adecuado para beneficiarse de la adición de soluciones automatizadas que le permitirán reducir el esfuerzo manual necesario para identificar las dianas de sus anticuerpos más prometedores y agilizar el descubrimiento.
Pasos del despliegue de fagos
Paso 1: Panning
El “panning” o selección es un proceso iterativo para enriquecer una población con fagos que posean alta afinidad de unión a una diana de interés en comparación con otros fagos. Comience enriqueciendo su población de fagos con fagos con alta afinidad de unión mediante la exposición de su biblioteca al antígeno de elección y después eluya y amplifique únicamente aquellos fagos con la afinidad de unión más alta.
Paso 2: Selección de colonias
Los bacteriófagos seleccionados en el paso anterior se clonan y se seleccionan para aislar cada uno de los fagos que se unen a proteínas únicas.
Paso 3: Interacciones antígeno-anticuerpo
Durante el panning se seleccionan los fagos que despliegan las proteínas con afinidad de unión más alta en comparación con los fagos que despliegan proteínas de menor afinidad. Este proceso de selección cualitativo requiere validación mediante inmunoensayos más cuantitativos para evaluar las interacciones antígeno-anticuerpo, como ELISA, inmunofluorescencia, HTRF, fijación de complemento, aglutinación o precipitación.
Paso 4: Cribado funcional
Tras la caracterización de las interacciones antígeno-anticuerpo, las moléculas candidatas se someten a un cribado de su actividad funcional (p. ej., neutralización vírica o eficiencia de vacuna), utilizando a menudo ensayos con células.
Tecnología de despliegue de fagos para la producción de anticuerpos
El sistema QPix™ acelera el flujo de trabajo para el cribado de anticuerpos en el despliegue de fagos
En aplicaciones industriales, desde biotecnología a biología sintética, se utiliza el despliegue de fagos por su capacidad de alto rendimiento para la determinación de interacciones de proteínas e ingeniería de proteínas. Sin embargo, para seleccionar los ligandos de alta afinidad que pueden reconocer una diana virgen a partir de una biblioteca de fagos (\~107-1012), es necesario eliminar mediante lavados los bacteriófagos que no se unen, y los fagos que se unen específicamente a las moléculas diana se eluyen y se recogen mediante 3-5 rondas de panning. Utilizando métodos convencionales, esto puede ser laborioso cuando se realizan cribados de múltiples selecciones con diferentes antígenos simultáneamente. Para acelerar el cribado, los científicos están incorporando nuevas tecnologías, como los sistemas QPix™, en sus flujos de trabajo para agilizar el cribado de anticuerpos mediante despliegue de fagos.
El sistema QPix es ideal para automatizar la siembra y la selección de clones y es, además, un sistema completo de gestión de bibliotecas de fagos.
- Selección a una velocidad de 3000 clones por hora, con una eficiencia superior al 98 %.
- 8 horas al día de tiempo de ejecución sin necesidad de supervisión.
- Cribado y selección de hasta 30 000 colonias al día.
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